Vì hoạt tính miễn dịch chỉ đo đƣợc trên những phân tử kháng thể đã gắn phóng xạ, nên xác suất kháng thể gắn đơn hoặc đa iod (mono hoặc poly iod) đƣợc tính tốn theo lý thuyết cơ bản nhƣ sau. Phân bố xác suất của 131I (phần A) và 127I (phần B) đối với số iod (x) trên mỗi phân tử kháng thể có thể viết là (a + b)x (nhị thức newton). Nếu 2 iod gắn trên phân tử kháng thể thì cơng thức sẽ viết là a2 + 2ab + b2, khi đó a2 + 2ab là xác suất kháng thể sẽ gắn với 1 nguyên tử iod 131I (2ab) hoặc 2 nguyên tử iod 131I (a2), và b2 là xác suất mà kháng thể chỉ iod hoá với 127I. Khi đó xác suất gắn phóng xạ của Pa(x) cho thấy số iod trên mỗi phân tử kháng thể đƣợc tính tốn dùng phƣơng trình (2):
Pa(x) = (a + b)2 - b2 (2)
Nhân cả hai phƣơng trình (một đại diện cho xác suất xảy ra gắn số iod trên phân tử Ab, một đại diện cho khả năng gắn xảy ra) sẽ cho ra xác suất F(x) tạo thành hợp chất gắn . Nhƣ vậy kết quả gắn kháng thể đơn dòng rituximab với đồng vị phóng xạ 131I cho thấy chất phóng xạ 131I gắn dễ dàng vào phân tử kháng thể bằng phƣơng pháp chloramin T theo hoạt độ riêng. Kết quả cho hiệu suất gắn cao, đạt khoảng 96 - 97%. Q trình gắn phóng xạ theo tỉ lệ mol giữa iod và kháng thể là phù hợp với tính tốn lý thuyết thống kê toán học.
0 5000 10000 15000 20000 25000 0 2 4 6 8 10 12 Hoạt độ phóng xạ ( Ci) Phân đoạn (ml) 131I-rituximab 6,6 Ci/g 131I 131I-rituximab 2,0 Ci/g
3.1.6.Kết quả tinh chế phức hợp 131I-rituximab và theo dõi tính ổn định
Hỗn hợp phản ứng có chứa phức hợp miễn dịch phóng xạ 131I-rituximab đƣợc tinh sạch qua cột sắc ký lọc gel sephadex G25 PD10.Độ tinh khiết hóa phóng xạ của phức miễn dịch 131I-rituximab sau khi tinh chế đạt hơn 98%, hình 3.6:
Hình 3.6. Đồ thị kiểm tra độ tinh khiết hóa phóng xạ của 131I-rituximab, TLC, 10 x 100, Bioscan