3.1.1. Đánh giá tiêu chuẩn y tế của mẫu ngẫu nhiên.
104 ngƣời sinh sống tại Lâm Đồng thuộc nhiều lứa tuổi đến bệnh viện để khám sức khỏe lập hồ sơ y tế xin việc, khám sức khỏe định kỳ, không phải là bệnh nhân. Kết quả sức khỏe bình thƣờng đƣợc ghi trong 104 hồ sơ sức khỏe và chỉ tiêu huyết học bình thƣờng đƣợc ghi trên phiếu xét nghiệm của bệnh viện Đa khoa Lâm Đồng có trong (phụ lục1.1).
3.1.2. Kết quả đánh giá chỉ số phân bào nguyên nhiễm
Tồn bộ các mẫu máu đều đƣợc ni cấy in vitro theo thƣờng qui phân tích sai hình NST của IAEA và tiêu chuẩn TCCS-VNCHN 2014. Xác định chỉ số phân bào nguyên nhiễm của từng đối tƣợng trên kính hiển vi NIKON Elapse 80i độ phóng đại 100x (10 x10). Kết quả phân tích cho thấy tất cả các tiêu bản đều có MI nằm trong khoảng 2,00% – 2,70%.
3.1.3. Kết quả phân tích sai hình NST.
Phân tích, nhận diện sai hình NST dựa trên nguyên tắc bảo toàn đơn vị nhiễm sắc của các kiểu sai hình NST ở metapha của chu kỳ tế bào đầu tiên sau tổn thƣơng. Nguyên tắc này dựa trên cơ chế hình thành các kiểu sai hình NST do tổn thƣơng DSB và cơ chế tái liên kết cặp các “đầu dính”. Mảnh khơng tâm xuất hiện do trong metapha có ít nhất 1 DSB, sai hình hai tâm do ít nhất 2 DSB trên 2 NST, sai hình vịng có tâm do 2 DSB trên 2 vai cùng NST, sai hình vịng khơng tâm do 2 DSB trên cùng vai của NST. Kết quả đã thu đƣợc các kiểu sai hình đa tâm, mảnh khơng tâm, đứt nhiễm sắc tử ở các mẫu phân tích. Một số kiểu sai hình đại diện đã đƣợc ghi nhận sau:
Đa tâm (n.36) (46 đv*) Đa tâm (n.22) (46 đv)
Mảnh không tâm (n.91) (47 đv) Đứt nhiễm sắc tử (n.3)
Hình 3.1. Một số kiểu sai hình NST ở nhóm đối tượng ngẫu nhiên.
Đặc điểm bảo toàn đơn vị nhiễm sắc đƣợc thể hiện ở các metapha có sai hình chứng tỏ sự bảo toàn các mảnh do tồn thƣơng chuỗi phân tử ADN ở tế bào lympho trong cơ thể. Nhờ vào khả năng lƣu giữ tổn thƣơng ADN dƣới dạng các sai hình NST ở tế bào lympho mà chúng đƣợc sử dụng để phân tích và đánh giá q trình tác động của các nhân tố môi trƣờng lên cơ thể.
Kết quả phân tích rút ra các giá trị thống kê ở cấp độ tồn nhóm có trên bảng 3.1.
Bảng 3.1. Tần số các kiểu sai hình NST ngẫu nhiên ở cấp độ nhóm.
Giá trị thống kê Tần số các kiểu sai hình (%)
Đa tâm Mảnh Đứt nhiễm sắctử
Trung bình 0,023 0,046 0,103
Độ lệch chuẩn (SD) 0,048 0,074 0,108
Sai số chuẩn (SE) 0,005 0,007 0,011
Kết quả từ bảng 3.1 cho thấy các giá trị sai hình đa tâm, mảnh và đứt nhiễm sắc tử đều ở mức ngẫu nhiên. Trên cơ sở phân nhóm các yếu tố ảnh hƣởng đến sai hình NST nhƣ tuổi, cơng việc, giới tính, nghiện thuốc lá, kết quả đánh giá tính khác biệt thống kê đƣợc tiến hành theo phƣơng pháp kiểm định t (t-test) theo các cặp phân nhóm đối nhau về ảnh hƣởng các yếu tố khả dĩ liên quan đến sai hình NST ngẫu nhiên mà các nghiên cứu Quốc tế phân loại nhƣ sau:
3.1.3.1. Theo phân nhóm giới tính.
Bảng 3.2. Kết quả thống kê các giá trị sai hình NST theo phân nhóm giới tính.
Giới tính n Tần số các kiểu sai hình (%)
Đa tâm Mảnh Đứt nhiễm sắc tử
Nam 72 0,022 ± 0,045 0,038 ± 0,061 0,106 ± 0,103 Nữ 32 0,026 ± 0,053 0,065 ± 0,097 0,096 ± 0,119
Kiểm định t-test với df (bậc tự do) = n1 + n2 – 2 = 102. Giá trị t tính
theo công thức thức t = (X1 – X2) / [(S12 /n1) + (S22 /n2)]1/2. Kết quả: tdi = 0,372, tfra = 1,452, tchb = 0,412.
Với df = 102 và xác suất 95% (α = 5%) các giá trị t vô hiệu (sai khác khơng có ý nghĩa thống kê) nằm trong khoảng -1,98 đến 1,98, nhƣ vậy khơng có khác biệt ý nghĩa thống kê giữa 2 phân nhóm nam và nữ. Sự sai khác về tần số sai hình đa tâm, mảnh khơng tâm và đứt nhiễm sắc tử giữa 2 nhóm số liệu nam và nữ khơng có ý nghĩa thống kê.
Kết quả nhƣ vậy phù hợp với bản chất của hiệu ứng sai hình NST khơng có sự mẫn cảm khác nhau giữa nam và nữ trong cùng mơi trƣờng sống. Tình trạng nhƣ vậy cũng đã đƣợc cơng bố đối với các cộng đồng dân cƣ cùng chịu chung tác động môi trƣờng ở vùng West Bengan do nhiễm Asen, Nam Âu do bụi phóng xạ Chernobyl đã cơng bố.
3.1.3.2.Đánh giá theo phân nhóm tuổi.
Phân bố đối tƣợng theo tuổi đƣợc tính theo đơn vị 10 năm. Đơn vị này phù hợp với khả năng ảnh hƣởng của bức xạ vũ trụ đến tần số sai hình NST ở tế bào lympho ngƣời đƣợc cơng bố bởi Tonomura năm 1983. Tồn bộ 104 đối tƣợng lấy mẫu đƣợc phân bố vào 4 phân nhóm tuổi: <30, 30-39, 40-49 và ≥50. Số liệu chi tiết đƣợc đƣa ra trong phụ lục 1, kết quả thống kê phân bố theo độ tuổi có trên bảng 3.3.
Bảng 3.3. Kết quả thống kê các giá trị sai hình NST theo tuổi (%).
Nhóm tuổi n Đa tâm % Mảnh % Đứt nhiễm sắc tử % <30 26 0,011 ± 0,030 0,068 ± 0,086 0,109 ± 0,095 30-39 26 0,027 ± 0,053 0,029 ± 0,052 0,075 ± 0,090 40-49 27 0,027 ± 0,056 0,026 ± 0,081 0,107 ± 0,107 ≥50 25 0,028 ± 0,047 0,063 ± 0,066 0,121 ± 0,137
Các giá trị đa tâm, mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử ở 4 nhóm tuổi đều ở mức ngẫu nhiên 1/1000. Đối với mảnh khơng tâm ở 2 nhóm 30-39 tuổi và 40-50 tuổi có biến thiên lớn và giá trị trung bình thấp hơn 2 nhóm cịn lại.
Đối với đa tâm ở các nhóm tuổi 30-39, 40-49 và ≥50 cao hơn ở nhóm <30 nhƣng chƣa đủ mức kết luận có sai khác có ý nghĩa.
Kiểm định t-test đƣợc tiến hành với các cặp kiểm định giữa mỗi nhóm tuổi so với nhóm < 30 tuổi, kết quả đƣợc đánh giá với khoảng t vô hiệu ở df = 50, xác suất 95% (α = 5%) từ -2.01 đến 2.01, nhƣ vậy đã không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về tần số sai hình đa tâm, mảnh khơng tâm cũng nhƣ đứt nhiễm sắc tử ở các cặp kiểm định nhóm tuổi. Phân tích số liệu trên cơ sở hàm số phông ngẫu nhiên của Tonomura y = 2,18.10-4
+ 1,7.10-4 . X, lúc này giá trị di30 = 0,073%, di50 = 0,107% và so sánh với số liệu trên bảng 3.3 cho thấy đa tâm ở các nhóm tuổi nghiên cứu này thấp hơn, tuy nhiên không vƣợt q 0,1%. Kết quả nghiên cứu cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa giữa các nhóm tuổi đại diện.
3.1.3.3. Đánh giá theo phân nhóm cơng việc
Theo điều tra công việc của đối tƣợng nghiên cứu, chủ yếu có 3 loại hình cơng việc gồm: khơng làm nông là những ngƣời đã đi làm với các công việc khác nông nghiệp, nông nghiệp và nhóm các đối tƣợng chƣa có cơng việc gồm học sinh và nội trợ. Kết quả phân tích số liệu đƣợc đƣa ra trong phụ lục 1, thống kê theo 3 nhóm đối tƣợng thể hiện trong bảng 3.4.
Bảng 3.4. Kết quả thống kê các giá trị sai hình NST theo cơng việc (%)
Nhóm cơng việc n Đa tâm (%) Mảnh (%) Đứt nhiễm sắc tử (%)
Không làm nông 32 0,009 ± 0,027 0,041 ± 0,088 0,101 ± 0,117 Nông 33 0,032 ± 0,051 0,042 ± 0,055 0,113 ± 0,108 Chƣa đi làm 39 0,025 ± 0,052 0,062 ± 0,092 0,098 ± 0,097
Các giá trị đa tâm, mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử ở 3 công việc đều ở mức ngẫu nhiên khoảng 1/1000. Giá trị đa tâm của các nhóm khơng làm nơng, làm nông, chƣa đi làm theo thứ tự là 0,009 ± 0,027; 0,032 ± 0,051;
0,025 ± 0,052, đều có đặc điểm độ lệch chuẩn lớn hơn giá trị trung bình chứng tỏ phân bố các tham số đó khơng đồng đều giữa các đối tƣợng ngay trong từng nhóm cơng việc. Đối tƣợng mã số 12 và 104 trong nhóm đối tƣợng chƣa đi làm đã làm tăng tần số dicentric ở nhóm này.
Nhóm làm nơng chỉ có một sự bất thƣờng ở đối tƣợng mã số 12, tuy nhiên tần số dicentric lại cao hơn ở nhóm khác và cao hơn 3 lần so với nhóm khơng làm nơng. Các giá trị đa tâm, mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử phân tích đƣợc ở nhóm khơng làm nơng thấp nhất trong cả 3 nhóm, kiểm định t đƣợc tiến hành với các cặp số liệu so với nhóm khơng làm nơng, kết quả đƣợc đánh giá với khoảng t vô hiệu ở df = trong khoảng 60 - 80 và xác suất 95% (α = 5%) từ -2.00 đến 2.00, sự khác biệt thống kê chỉ xảy ra với đa tâm giữa 2 phân nhóm khơng làm nơng và làm nông.
Với các giá trị kiểm định với các chỉ số mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử đã không cho thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các phân nhóm, hiện trạng này phù hợp với đặc điểm mẫu ngẫu nhiên có sự phân định nhóm nghề không thực sự rõ ràng.
3.1.3.4. Đánh giá theo phân nhóm hút thuốc lá.
Nicotin trong thuốc lá đƣợc xem là tác nhân gây nên hiệu ứng trao đổi nhiễm sắc tử chị em, liên quan đến tổn thƣơng nhiễm sắc tử. Kết quả điều tra mẫu cho thấy 34 đối tƣợng thƣờng xuyên hút thuốc với số lƣợng hàng ngày là 8,34 ± 5,58 điếu. Kết quả phân tích số liệu đƣợc đƣa ra trong ( phụ lục 1.1), theo đó kết quả thống kê của 2 nhóm đối tƣợng đƣợc thể hiện bảng 3.5.
Bảng 3.5. Kết quả thống kê các giá trị sai hình NST theo hút thuốc (%).
Nhóm mẫu Số mẫu Đa tâm (%) Mảnh (%) Đứt nhiễm sắc tử (%) Có hút 34 0,030 ± 0,051 0,036 ± 0,063 0,113 ± 0,109 Không hút 70 0,020 ± 0,046 0,051 ± 0,079 0,098 ± 0,108
Các giá trị thống kê đa tâm, mảnh khơng tâm, đứt nhiễm sắc tử ở nhóm có hút thuốc lần lƣợt là 0,030 ± 0,051; 0,036 ± 0,063; 0,113 ± 0,109 và ở
nhóm khơng hút thuốc là 0,020 ± 0,046; 0,051 ± 0,079; 0,098 ± 0,108. Các giá trị đa tâm, mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử ở 2 nhóm tuổi đều ở mức ngẫu nhiên khoảng 1/1000.
Đặc điểm độ lệch chuẩn cao hơn giá trị trung bình chứng tỏ số liệu có tính phân tán giữa các đối tƣợng trong phân nhóm. Giá trị đa tâm ở nhóm hút thuốc cao hơn ở nhóm khơng hút thuốc 1,5 lần nhƣng đều nằm dƣới ngƣỡng 1/1000. Kiểm định t-test đƣợc tiến hành với các cặp số liệu phân tích trên 2 nhóm, kết quả đánh giá với khoảng t vơ hiệu ở df = 102, xác suất 95% (α = 5%) từ -1.98 đến 1.98 cho thấy sự khác biệt thống kê đã không xảy ra ở 2 phân nhóm này. Kết quả chƣa đạt đến mức cảnh báo thói quen hút thuốc trong trƣờng hợp này có thể liên quan đến mức độ nghiện thuốc chƣa đến mức phân giải tính khác biệt về sai hình NST. Trên cơ sở phân tích các chỉ số sai hình NST ở 104 đối tƣợng ngẫu nhiên và kết quả kiểm định t giữa các phân nhóm, kết quả thống kê các giá trị đa tâm, mảnh không tâm, đứt nhiễm sắc tử ở mức nhóm và ở mức phân nhóm yếu tố ảnh hƣởng đƣợc tổng kết trên bảng 3.6.
Bảng 3.6. Kết quả đánh giá giá trị thống kê ở các phân nhóm.
Nhóm mẫu Đa tâm (%) Mảnh (%) Đứt nhiễm sắc tử (%) Giới tính Nam 0,022 ± 0,045 0,038 ± 0,061 0,106 ± 0,103 Nữ 0,026 ± 0,053 0,065 ± 0,097 0,096 ± 0,119 Nhóm tuổi <30 0,011 ± 0,030 0,068± 0,086 0,109± 0,095 30-39 0,027± 0,053 0,029± 0,052 0,075± 0,090 40-49 0,027± 0,056 0,026± 0,081 0,107± 0,107 ≥50 0,028± 0,047 0,063± 0,066 0,121± 0,137 Ngành nghề Phi NN 0,009 ± 0,027 0,041 ± 0,088 0,101 ± 0,117 NN 0,032 ± 0,051 0,042 ± 0,055 0,113 ± 0,108 Khác 0,025 ± 0,052 0,062 ± 0,092 0,098 ± 0,097 Thuốc lá Hút thuốc 0,030 ± 0,051 0,036 ± 0,063 0,113 ± 0,109 Không hút 0,020 ± 0,046 0,051 ± 0,079 0,098 ± 0,108
Các giá trị trung bình đa tâm, mảnh khơng tâm và đứt nhiễm sắc tử ở cấp độ nhóm tƣơng ứng là 0,023 ± 0,048; 0,046 ± 0,074 và 0,103 ± 0,108. Kết quả này nằm trong giới hạn khảo sát của Awa 1992, Bender1988, Leonard, 1987, Lloyd, 1980 và Tonomura, 1983 với sai hình đa tâm khơng vƣợt 0,28%, mảnh không tâm không vƣợt 1,05% và đứt nhiễm sắc tử không vƣợt 2,0%. Các giá trị đa tâm, mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử ở nhóm khảo sát cũng nằm trong giới hạn ngẫu nhiên đƣợc công bố của T. Que và cộng sự đối với các đối tƣợng các cán bộ khoa học Viện Nghiên cứu hạt nhân năm 1997, cơng nhân nhà máy đóng tàu Huyndaivinashin Khánh Hòa năm 2002, thiết bị điện Vũng Tàu năm 2008 với đa tâm dƣới 1/1000, mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử không quá 0,20%.
Kết quả khảo sát đã cho thấy có sự khác biệt có ý nghĩa về kiểu sai hình radical và các giá trị đa tâm,mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử cao khác thƣờng ở các đối tƣợng dân cƣ chuyên trồng cà phê, dâu tằm và trà đƣợc T. Que và cộng sự công bố năm 1997,1998, 2000, 2004, 2009 theo đó tần số đa tâm = 0,05 ± 0,17; mảnh = 1,31 ± 0,98; đứt NS tử = 1,59 ± 1,07; rad = 0,09 ± 0,24.
Sai hình đa tâm là tham số chính của bộ số liệu vì tính định lƣợng chính xác của nó, bộ số liệu sai hình đa tâm có ý nghĩa nhƣ một công bố của thành viên Việt Nam trong WHO BioDoseNetworks và so sánh Quốc tế, là bộ số liệu phông sử dụng trong đo liều sinh học, cấp cứu tai nạn phóng xạ và đánh giá nhiễm bẩn mơi trƣờng. Ngồi giá trị thống kê ở cấp độ quần thể thì phân bố của giá trị đa tâm ở các phân nhóm yếu tố ảnh hƣởng cho biết mức độ đồng nhất và ý nghĩa ổn định.
Phân bố của đa tâm giữa 2 nhóm giới tính tƣơng ứng là 0,022 ± 0,045 và 0,026 ± 0,053, giữa 4 nhóm tuổi tƣơng ứng là 0,011 ± 0,030; 0,027 ± 0,053; 0,027 ± 0,056 và 0,028 ± 0,047, giữa 3 nhóm ngành nghề là 0,009 ± 0,027; 0,032 ± 0,051 và 0,025 ± 0,052, giữa 2 nhóm ngƣời hút thuốc lá và nhóm ngƣời khơng hút thuốc lá:0,030 ± 0,051 và 0,020 ± 0,046.
Chỉ có khác biệt có ý nghĩa giữa nhóm phi nơng nghiệp với 2 nhóm nơng nghiệp và khác, giữa các nhóm tuổi ≥ 30 với nhóm < 30. Cùng với kết quả thống kê đa tâm giữa các phân nhóm, kết quả khơng có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các phân nhóm của các giá trị mảnh khơng tâm và đứt nhiễm sắc tử chứng tỏ nhóm dân cƣ đƣợc khảo sát khơng bị ảnh hƣởng của mơi trƣờng đặc biệt dẫn tới hiện trạng sai hình NST khác thƣờng.
3.2. KHẢO SÁT SAI HÌNH NST Ở MỘT SỐ NHÓM ĐỐI TƢỢNG DÂN CƢ ĐẶC THÙ MƠI TRƢỜNG.
3.2.1. Nhóm đối tƣợng cơng việc chẩn đốn hình ảnh tại một số bệnh viện. bệnh viện.
3.2.1.1. Điều tra các yếu tố liên quan đến nhóm đối tượng.
Kết quả điều tra mẫu cho thấy các đối tƣợng này làm công tác chẩn đốn hình ảnh, cơng việc liên quan đến các yếu tố có khả năng gây tổn thƣơng phân tử ADN nhƣ các nguồn phóng xạ kín suất liều thấp, tia lade, sóng siêu âm và một số hóa chất đặc biệt dùng cho cản quang và hiện ảnh.
Ở các bệnh viện lớn, việc sử dụng kỹ thuật CT (computed tomography scan) rất hiệu quả trong phẫu thuật nhƣng mức liều mà ê kíp phải chịu khoảng 10mGy/lần là một lo ngại. Các đối tƣợng của nhóm khảo sát này làm việc tại 6 bệnh viện, trong đó 15 ngƣời cơng tác tại bệnh viện đa khoa cấp tỉnh và 15 ngƣời thuộc 5 bệnh viện tuyến huyện (phụ lục 2.1).
3.2.1.2. Kết quả đánh giá chỉ số phân bào nguyên nhiễm.
Kiểm tra đánh giá tiêu bản hiển vi theo chỉ số phân bào nguyên nhiễm, kết quả phân tích đã xác nhận tất cả 30 mẫu đều có chỉ số phân bào nguyên nhiễm MI ≥ 2,5%, nhƣ vậy tiêu bản ở tất cả các mẫu đều đạt tiêu chuẩn phân tích.
3.2.1.3. Kết quả phân tích sai hình NST.
Kết quả phân tích sai hình NST đƣợc thực hiện theo chuẩn 1000 metapha / mẫu. Các kiểu sai hình đa tâm, mảnh không tâm và đứt nhiễm sắc tử đều đƣợc phát hiện ở các đối tƣợng thuộc nhóm này.
Một số kiểu hình tiêu biểu đƣợc chỉ ra trong các ảnh chụp hiển vi sau đây:
Mảnh không tâm (n.13)(47 đv) Mảnh không tâm (n.25)(47 đv)
Sai hình radical (n.6) (45 đv). Sai hình radical (n.11)(45 đv).
Hình 3.2. Bằng chứng sai hình đa tâm, mảnh, đứt nhiễm sắc tử và radical phát hiện ở nhóm đối tượng nhân viên chẩn đốn hình ảnh.