Kết quả cho thấy, khi pH tăng dần từ 11 đến 12, tỉ lệ khối lượng tiểu phân betaglucan ở vùng nano có xu hướng tăng lên. Mẫu nghiền tại pH 12 có tỉ lệ khối lượng tiểu phân ở vùng nano lớn hơn đáng kể so với vùng pH 11,5 và 11 (p<0,05). Điều này phù hợp với giả thiết pH 12 là giá trị cần thiết để quá trình tháo xoắn xảy ra hiệu quả, khi đó các lực tác động trong quá trình nghiền sẽ dễ chia nhỏ tiểu phân betaglucan hơn. Chính vì vậy, đề tài đã lựa chọn pH dịch nghiền là 12 để tiến hành các khảo sát khác.
b) Ảnh hưởng của sự có mặt của tác nhân tháo xoắn và thuỷ phân
Ảnh hưởng của sự có mặt của tác nhân tháo xoắn và thuỷ phân được đánh giá thông qua so sánh kết quả mẫu D và E so với các mẫu A, B, C và nguyên liệu. Kết quả cho thấy KTTPTB, PDI và tỉ lệ dược chất vùng nano của mẫu D, E đều nhỏ hơn so với mẫu A, B và nguyên liệu (p<0,05); so với mẫu C, KTTPTB của mẫu D và E đều nhỏ hơn (p<0,05), PDI khác biệt khơng có ý nghĩa (p>0,05) nhưng đều có xu hướng giảm, tỉ lệ dược chất vùng nano của mẫu E lớn hơn đáng kể mẫu C (p<0,05) cịn mẫu D thì khơng khác biệt (p>0,05). Như vậy, có thể thấy sự có mặt đầy đủ của tác nhân tháo xoắn và thuỷ phân là cần thiết đối với hiệu quả của quá trình nghiền.
c) Ảnh hưởng của thứ tự đưa tác nhân tháo xoắn và thuỷ phân
Từ kết quả của mẫu D và E, có thể thấy việc đưa tác nhân thuỷ phân liên kết glycosid trước tác nhân tháo xoắn cho KTTPTB nhỏ hơn và tỉ lệ tiểu phân betaglucan ở vùng nano nhiều hơn (p<0,05), PDI cũng có xu hướng giảm nhưng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05). Hiện tượng này có thể được giải thích như sau: trong quy trình D, thời gian tiếp xúc giữa tác nhân thuỷ phân (acid) với betaglucan tương đối ngắn do bị trung hoà hết bởi NaOH. Đây cũng là lí do khiến KTTP quy trình D khơng khác biệt so với quy trình C. Ngược lại, với quy trình E, tác nhân acid tiếp xúc trực tiếp với betaglucan trong thời gian dài hơn, với sự hỗ trợ của nhiệt độ, phản ứng thuỷ phân liên kết glycosid xảy ra có ý nghĩa đối với q trình làm giảm KTTP.
Như vậy, với cặp tác nhân tháo xoắn – thuỷ phân là NaOH và HCl, đề tài đã lựa chọn việc đưa tác nhân thuỷ phân trước tác nhân tháo xoắn để phát huy tối đa vai trò của
0.00 15.00 30.00 45.00 60.00 75.00 11 11,5 12 T ỉ lệ (%) Giá trị pH Vùng <1 mcm Vùng 1-10 mcm Vùng > 10 mcm
34
mỗi thành phần. Tiểu phân betaglucan thu được có KTTPTB đạt 416,4 ± 8,9 nm và tỉ lệ tiểu phân đạt kích thước vùng nano cao nhất, đạt 69,87 ± 4,41%.
3.3.1.2. Ảnh hưởng của chất ổn định
Tiểu phân betaglucan bào chế được về cơ bản đã đáp ứng được yêu cầu về kích thước, tuy nhiên chưa ổn định. Trong quá trình bảo quản mẫu, KTTPTB và PDI của mẫu tăng lên nhanh chóng. Kết quả tương tự cũng đã được báo cáo trong KLTN của dược sĩ Ngơ Hồi Xn [5]. Do vậy, việc phối hợp với các chất ổn định là cần thiết.
Đề tài đã tiến hành khảo sát lại ảnh hưởng của một số chất ổn định, bao gồm NaTPP, PVP K30 và Poloxamer 407 như sau: 2 ml dung dịch chất ổn định với nồng độ 1% được thêm vào hệ sau bước điều chỉnh pH bằng dung dịch NaOH, rồi tiến hành nghiền trên thiết bị nghiền bi Retsch MM200, các thơng số của quy trình nghiền giống như thông số đã nêu ở mục 2.3.2.1. Kết quả về KTTPTB, PDI tại thời điểm bào chế và độ tăng kích thước sau 1 ngày (D1d) và tỉ lệ khối lượng tiểu phân ứng với các phân vùng kích thước được tóm tắt trong bảng 3.9.
Bảng 3.9. Ảnh hưởng của chất ổn định tới một số đặc tính tiểu phân betaglucan
Thông số Chất ổn định NaTPP PVP K30 Poloxamer 407 Khơng có chất ổn định Tỉ lệ khối lượng tiểu phân (%) < 1 μm 63,09 ± 5,13 64,61 ± 2,97 66,95 ± 6,38 69,87 ± 4,41 1-10μm 20,46 ± 1,58 21,50 ± 1,99 10,73 ± 1,26 8,67 ± 0,18 > 10 μm 16,45 ± 4,41 13,89 ± 1,04 22,23 ± 6,78 21,46 ± 4,16 KTTPTB (nm) 608,6 ± 24,6 381,8 ± 14,3 606,6 ± 19,0 416,4 ± 8,9 PDI 0,205 ± 0,025 0,235 ± 0,058 0,354 ± 0,039 0,246 ± 0,043 D1d 1,687 1,198 1,291 4,160
Kết quả cho thấy, khi thêm chất ổn định, tỉ lệ khối lượng tiểu phân vùng nano có xu hướng giảm đi so với mẫu khơng có chất ổn định, tuy nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê giữa tất cả các mẫu (p>0,05). Như vậy, có thể sơ bộ kết luận rằng sự có mặt của chất ổn định ít ảnh hưởng tới tỉ lệ tiểu phân vùng nano thu được sau quá trình nghiền.
KTTPTB của mẫu PVP K30 nhỏ nhất, trong khi đó mẫu NaTPP và poloxamer 407 lại có xu hướng tăng so với mẫu khơng có chất ổn định. PDI của các mẫu hầu như không có sự khác biệt, chỉ mẫu poloxamer 407 có PDI lớn hơn so với các mẫu còn lại (p<0,05). Từ kết quả độ tăng kích thước tiểu phân betaglucan, trong đó, PVP K30 cũng là tá dược thể hiện khả năng ổn định tiểu phân tốt hơn so với các mẫu cịn lại. Vì vậy, đề tài đã lựa chọn PVP K30 là chất ổn định cho hệ tiểu phân betaglucan để tiếp tục nghiên cứu.
Kết luận: Qua các khảo sát trên, kết hợp với kết quả KLTN của dược sĩ Ngơ Hồi
35 + Khối lượng betaglucan: 20 mg + Thể tích HCl 1% (tt/tt): 4 ml + Thể tích NaOH 2% (kl/tt): 2 ml + Thể tích PVP K30 1% (kl/tt): 2 ml
Đề tài cũng đã lựa chọn được thứ tự đưa tác nhân: tác nhân acid được khuấy với betaglucan trong 60°C/1 giờ trước rồi mới thêm tác nhân kiềm.
3.3.2. Ảnh hưởng của một số yếu tố thuộc về quy trình nghiền bi
3.3.2.1. Ảnh hưởng của tốc độ nghiền bi
Tiến hành nghiền bi với mẫu tối ưu được chuẩn bị như ở mục 3.2.1 trên thiết bị nghiền Retsch MM200 với các tốc độ nghiền khác nhau (15 Hz, 30 Hz), các thông số tương tự như thông số đã nêu trong mục 2.3.2.1. Kết quả tỉ lệ khối lượng betaglucan ứng với các vùng kích thước đánh giá trên thiết bị Mastersizer 3000E được trình bày tại bảng PL-2.2. và hình 3.11.