- 8 0 ả g 3.3: Kết ả t ử ng m SA t ên k áng ết t n t đượ vớ nồng độ
NỘI DUNG 6: Kiểm tra kiểu hình biểu hiện của dịng ruồi đã bị knock down gene
down gene
Chúng tôi tiến hành khảo sát trên ruồi trưởng thành để theo dõi tác động theo thời gian của sự knock-down dUCH lên hệ vận động của ruồi. Kết quả được biểu diễn thành đồ thị như sau:
Hình 6.1. Đồ th biểu diễn khả năng vận động c a ruồi theo thời gian
Dựa vào biểu đồ, có thể nhận thấy dịng ruồi knock-down dUCH di chuyển của chậm hơn dịng đối chứng. Nhưng để nhận định này có ý nghĩa về mặt thống kê, chúng tôi tiếp tục tiến hành đánh giá mức ý nghĩa bằng công cụ phân tắch t-test so sánh từng cặp.
Kết quả phân tắch thống kê như sau: (phụ lục đắnh kèm)
P
Ruồi cái 20cm Ruồi đực 20cm
0.01213 0.00195
- 92 -
- Ruồi knock-down dUCH có khả năng leo trèo k m hơn so với dòng đối chứng, điều này thấy rõ khi so sánh ở mức 20cm. Kết quả thống kê cũng cho thấy có sự khác biệt. Vậy, knock-down protein dUCH trong não ruồi có ảnh hưởng đến khả năng vận động của ruồi.
- 100% ruồi mang kiểu gene UAS-IR.-dUCH và Ddc- al đều cho kiểu hình như đã miêu tả ở trên.
Chúng ta đều biết, nguyên nhân gây bệnh Parkinson là do sự thiếu hụt dopamine trong não. Trong mục tiêu nghiên cứu của chúng tôi, chúng tơi mong muốn hướng đến việc làm rõ vai trị của protein UCH-L1trong cơ chế phát sinh bệnh Parkinson. Với mơ hình ruồi giấm chuyển gene knoc-down gene dUCH, chúng tơi đã thấy sự biểu hiện bất bình thường trên khả năng vận động của ruồi giấm. Chúng tôi tiếp tục tiến hành các thắ nghiệm nhằm tìm mối liên hệ giữa ảnh hưởng kiểu hình nói trên với bệnh Parkinson. Trước tiên, chúng tôi hướng tới việc khảo sát con đường sinh tổng hợp dopamine và ảnh hưởng của knock-down dUCH trên con đường này. Do vậy, chúng tôi tiến hành nhuộm não ruồi với kháng thể kháng tyrosine hydroxylase (TH), là một protein đóng vai trị quan trọng trong con đường sinh tổng hợp dopamine. Câu hỏi đặt ra ở đây là sự biểu hiện UCH-L1 có ảnh hưởng gì đến sự biểu hiện của tyrosine hydroxylase hay không?
- 93 -
Kết quả nhuộm miễn dịch huỳnh quang cho thấy lượng TH ở ng ruồi knock- down dUCH giảm đáng kể so với dịng đối chứng. Điều này có thể dẫn đến kết luận: knoc-down dUCH dẫn đến giảm lượng TH, từ đó làm cho lượng dopamine bị suy giảm và làm giảm khả năng vận động ở ruồi giấm.
Bên cạnh việc sử dụng dòng ruồi Ddc- al để knock-down dUCh tại các tế bào thần kinh sản sinh dopamine, chúng tôi cũng tiến hành knock-down dUCH ở não với một số dòng Gal4 driver khác. Các kết quả khảo sát kiểu hình ruồi knock-down được tổng kết trên bảng sau.
Bảng 3.2. Khảo sát ản ưởng c a knock-down dUCH tại các mô khác nhau trên ruồi
giấm chuyển gene bằng kỹ thuật biểu hi n gene đ n ướng mô sử dụng phức hợp Gal4-UAS
Promoter chuyên
biệt mô Đắch biểu hiện Kiểu hình ruồi
GMR-GAL4 Mắt
Mắt nhám, gây apoptosis, ảnh hưởng đến quá trình biệt hóa photoreceptor cell R7
Ddc-GAL4 Não (Tế bào thần kinh sản sinh Dopamine)
Ruồi giảm khả năng vận động, giảm hàm lượng tyrosine hydroxylase trong các tế bào sản sinh dopamine
Elav-GAL4 Não (Các tế bào thần kinh
tại não) Ruồi giảm khả năng vận động
TH-GAL4 Não (Tế bào thần kinh sản
sinh Dopamine) Ruồi giảm khả năng vận động
Tdc2-GAL4 Não (Tế bào thần kinh sản
sinh Dopamine) Ruồi giảm khả năng vận động
- 94 -
Các kết quả thu được là thống nhất trên các dòng ruồi knock-down dUCH bằng các promoter chuyên biệt mô não một lần nữa kh ng định các kết quả thực nghiệm của chúng tôi và cho thấy ảnh hưởng của việc knock-down dUCH làm suy giảm khả năng vận động của ruồi giấm. Bước đầu khảo sát, chúng tôi thấy, sự ảnh hưởng này có liên quan đến hàm lượng tyrosine hydroxylase, một enzyme quan trọng trong quá trình sinh tổng hợp dopamine.
- 95 -