Sau khi chạy khảo sát trên chuẩn Acrylamide với cột phân tích ODS-3V Inertsil kết quả thu được là pha động B với thành phần và tỉ lệ hợp lý tách AA hoàn toàn ra khỏi tạp, hình dạng peak ít bị kéo đuôi và chương trình nồng độ dung môi pha
động A để làm sạch cột sau khi chạy đẳng dòng dung môi pha động B cho acrylamide ra khỏi cột hoàn toàn
Hình 3.4: Sắc ký đồ của AA 100μg/l trong dung môi pha động HCOOH 0.5%
Hình 3.5: Sắc ký đồ của AA 100μg/l trong dung môi pha động HCOOH 0.1%
Nhận xét và bàn luận:
Nguyên nhân do HCOOH là một acid có khả năng phân tách ion H+ tăng khả
năng tạo ion cho nguồn tạo ion của khối phổ. Khi nồng độ HCOOH tăng khả
năng tạo ion H+ vào dung dịch giảm.
⇒ Chọn nồng độ HCOOH là 0.01%
- Khảo sát tỉ lệ Acetonitrile – HCOOH 0.01%:
Hình 3.7: Sắc ký đồ của AA 50μg/l trong dung môi pha động HCOOH 0.01% 85 - ACN 15
Hình 3.8: Sắc ký đồ của AA 50μg/l trong dung môi pha động HCOOH 0.01% 95 - ACN 5
Hình 3.9: Sắc ký đồ của AA 50μg/l trong dung môi pha động HCOOH 0.01% 98 - ACN 2
Bảng 3.3: So sánh tỉ lệ dung môi ACN-HCOOH 0.01% theo thời gian lưu, cường độ và diện tích mũi sắc ký Tỉ lệ dung môi ACN-HCOOH 0.01% Thời gian lưu RT (phút) Cường độ (chiều cao) Diện tích 15:85 2.27 31000 172300 5:95 3.09 110000 201800 2:98 3.5 62000 196800 Nhận xét và bàn luận:
Khi thêm dung môi hữu cơ với tỉ lệ chưa hợp lý vào pha động nước sẽ làm giảm thời gian lưu giữ của AA (rất phân cực) trên pha tĩnh, đồng thời làm giảm khả
năng tạo ion H+ dẫn đến độ nhạy của AA giảm.
⇒ Chọn nồng độ tỉ lệ Acetonitrile - HCOOH 0.01% là 5:95
Sau khi chạy đẳng dòng dung môi B (khỏang 4 phút đầu) để acrylamide hòan tòan ra khỏi cột tách, chạy chương trình nồng độ dung môi với 2 dòng A và B để làm sạch, phục hồi cột ngay sau khi chạy mẫu (chạy 50% dòng A và B từ
phút thứ 4.2 đến 6.2, 100% dòng A từ phút thứ 6.3 đến 8.3, sau cùng chạy 100% dòng B đểổn định cột cho lần chạy tiếp theo)
Kết quả thu được khi sử dụng các thông số sắc ký trên là các sắc đồ đẹp, ít thay
đổi cường độ tín hiệu (Intensity) và thời gian lưu (RT) ổn định (trong các lần chạy ở 4 ngày khác nhau)
Lần 1 RT: 3.08 phút, Intensity: 1.1.105
Lần 2 RT: 3.09 phút, Intensity: 1.1.105
Lần 4 RT: 3.09 phút, Intensity: 1.1.105
Hình 3.10: Các sắc ký đồ của AA với hệ pha động chọn lựa, trong các lần chạy ở 4 ngày khác nhau