2.1.1. Dụng cụ
- Ống ly tâm nhựa 2ml, 50ml
- Giá đựng ống ly tâm nhựa 2ml, 50ml
- Micropipette: 10-100µl, 100-1000µl, 1000-10000µl - Vial thủy tinh màu nâu 1.5ml
- Bình định mức 10ml, 25ml
2.1.2. Thiết bị
- Máy lọc nước siêu sạch Barnstead Easypure II - Máy đồng nhất mẫu, tốc độ 3000 – 8000 vòng/phút - Cân phân tích 4 số lẻ (độ nhạy 0,1 mg) Metler-Toledo - Máy lắc ngang IKA HS 260 basic
- Máy lắc Vortex
- Máy ly tâm Universal 320R Hettich - Máy đánh siêu âm
- Hệ thống máy sắc ký lỏng hiệu năng cao: Hiệu Shimadzu + Bơm LC – 20AD XR
+ Autosampler SIL – 20AD XR + Degasser DGU – 20 A5 + Interface CBM – 20A
+ Cột sắc ký phân tích: Inertsil ODS – 3V, 5 µm, 150 mm x 4,6 mm - Đầu dò khối phổ 2 lần(MS/MS) AB Sciex TripleQuad 5500
Turbo V source: kỹ thuật ion hóa phun điện tử (ESI)
2.1.3. Hoá chất, chất chuẩn Chất chuẩn: Chất chuẩn:
- Acrylamide 99.5%, hãng sản xuất Fluka, mã đặt hàng 01696, số lô 1254876
- Nội chuẩn Acrylamide(2,3,3-D3) 98%, hãng sản xuất CIL, mã đặt hàng 122775-19-3, số lô PR-17278
- Mẫu chuẩn được chứng nhận CRM BD 273 Sample No 0660 Toasted Bread (425 ± 29) ng/g
Hóa chất
Bảng 2.1:Các dung môi, hóa chất sử dụng trong bài nghiên cứu
Dung môi, hóa chất Độtinh khiết Hãng sản xuất
Methanol (MeOH) HPLC grade J.T.Baker
Acetonitrile (ACN) HPLC grade J.T.Baker
Aceton HPLC grade Merck
J.T.Baker
Acid Formic 99% HPLC grade Merck
Primary Secondary Amine (PSA) LC/MS/MS grade Agilent Chroma Bond
MgSO4 LC/MS/MS grade Merck
NaCl AR grade Trung Quốc
Nước siêu sạch
* Cách pha: Chất chuẩn:
Dung dịch chuẩn gốc acrylamide - AA 500µg/ml: cân chính xác khoảng 25.0 mg acrylamide vào cốc có mỏ 5 ml, thêm nước siêu sạch để hoà tan và chuyển dung dịch này vào bình định mức 50 ml, tráng rửa cốc nhiều lần, định mức đến vạch bằng nước siêu sạch. Dung dịch này được bảo quản ở 4oC, trong chai tối màu, ổn định trong 1 năm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Dung dịch nội chuẩn acrylamide (2,3,3-D3) - AAD3 500µg/ml: cân chính xác khoảng 12.5 mg acrylamide vào cốc có mỏ 5ml, thêm nước siêu sạch để hoà tan và chuyển dung dịch này vào bình định mức 25 ml, tráng rửa cốc nhiều lần, định mức đến vạch bằng nước siêu sạch. Dung dịch này được bảo quản ở 4oC, trong chai tối màu, ổn định trong 1 năm.
Dung dịch chuẩn trung gian AA 100µg/ml: lấy chính xác 2.0 ml chuẩn gốc AA 500µg/ml vào bình định mức 10 ml, thêm nước siêu sạch đến vạch. Dung dịch này được bảo quản trong chai tối màu, ở 20 – 25oC tránh ánh sáng, ổn định trong 2 tháng.
Dung dịch chuẩn trung gian AA 10µg/ml: lấy chính xác 0.2 ml chuẩn gốc AA 500µg/ml vào bình định mức 10 ml, thêm nước siêu sạch đến vạch. Dung dịch này được bảo quản trong chai tối màu, ở 20 – 25oC tránh ánh sáng, ổn định trong 2 tháng.
Dung dịch nội chuẩn AAD3 10µg/ml: lấy chính xác 0.2 ml chuẩn gốc AA 500µg/ml vào bình định mức 10 ml, thêm nước siêu sạch đến vạch. Dung dịch này được bảo quản trong chai tối màu, ở 20 – 25oC tránh ánh sáng, ổn định trong 2 tháng.
Dung dịch chuẩn trung gian AA 1µg/ml: lấy chính xác 1 ml chuẩn gốc AA 10µg/ml vào bình định mức 10 ml, thêm nước siêu sạch đến vạch. Dung dịch này
được bảo quản trong chai tối màu, ở 20 – 25oC tránh ánh sáng, ổn định trong 1 tuần
Dung dịch nội chuẩn AAD3 1µg/ml: lấy chính xác 1 ml chuẩn gốc AAD3 10µg/ml vào bình định mức 10 ml, thêm nước siêu sạch đến vạch. Dung dịch này
được bảo quản trong chai tối màu, ở 20 – 25oC tránh ánh sáng, ổn định trong 1 tuần
Chuẩn làm việc: được chuẩn bị theo bảng 2.2 Bảng 2.2: Chuẩn bị dung dịch làm việc Chuẩn V-dd AAD3 1µg/ml (µl) V-dd AA 1µg/ml (µl) Tổng th(ml) ể tích Nồng (ng/ml) độ AAD3 100 0 1 100 Chuẩn V-dd AAD3 1µg/ml (µl) V-dd AA 1µg/ml (µl) Tổng thể tích (ml) Nồng độ AA (ng/ml) 1 500 50 10 5 2 50 10 1 10 3 50 20 1 20 4 50 50 1 50 V-dd AAD3 1µg/ml (µl) V-dd AA 10µg/ml (µl) Tổng thể tích (ml) Nồng độ AA (ng/ml) 5 50 10 1 100 6 50 20 1 200 7 50 50 1 500 V-dd AAD3 1µg/ml (µl) V-dd AA 100µg/ml (µl) Tổng thể tích (ml) Nồng độ AA (ng/ml) 8 10 1 1000 9 20 1 2000 10 50 1 5000 Dung môi:
Dung dịch HCOOH 0.01%: thêm 100µl HCOOH 100% vào 999.9 ml nước siêu sạch, lắc đều đánh siêu âm
Dung dịch HCOOH 0.1%: thêm 1000µl HCOOH 100% vào 999.0 ml nước siêu sạch, lắc đều đánh siêu âm
Dung dịch HCOOH 0.5%: thêm 5000µl HCOOH 100% vào 995.0 ml nước siêu sạch, lắc đều đánh siêu âm
Dung dịch HCOOH 0.01% - ACN (85:15): trộn 850 ml dung dịch HCOOH 0.01% với 150 ml ACN, khuấy đều, đánh siêu âm
Dung dịch HCOOH 0.01% - ACN (95:5): trộn 950 ml dung dịch HCOOH 0.01% với 50 ml ACN, khuấy đều, đánh siêu âm
Dung dịch HCOOH 0.01% - ACN (98:2): trộn 980 ml dung dịch HCOOH 0.01% với 20 ml ACN, khuấy đều, đánh siêu âm