PHẦN 3 : VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.3.5. Phương pháp xác định khả năng kháng oxi hóa
Khả năng kháng oxy hóa của dịch chiết được xác định bằng phương pháp DPPH (Tabart and cs., 2009). Trolox được dùng làm chất chuẩn.
Nguyên tắc: DPPH là một gốc tự do bền, dung dịch có màu tím, bước sóng cực đại hấp thu tại 517 nm. Các chất có khả năng kháng oxy hóa sẽ trung hịa gốc DPPH bằng cách cho hydrogen, làm giảm độ hấp thu tại bước sóng cực đại và màu của dung dịch phản ứng sẽ nhạt dần, chuyển từ tím sang vàng nhạt. Thuốc thử DPPH được pha ngay trước khi tiến hành thí nghiệm để hạn chế ảnh hưởng đến kết quả thí nghiệm.
Cách tiến hành: Từ chất chuẩn Trolox, tiến hành pha dãy chuẩn có nồng độ 0; 42,8; 85,5; 213,8; 427,5; 641,3; 855 µmol/l, dung dịch DPPH 0,1 mM được pha bằng methanol. Hỗn hợp phản ứng gồm: 100 µl trolox đã pha lỗng với 2900µl dung dịch DPPH 0,1 mM. Lắc đều, ủ 30 phút trong tối, rồi đo mật độ quang ở bước sóng 517 nm (mỗi nồng độ lặp lại 2 lần). Mẫu dịch chiết được tiến hành tương tự nhưng thay dung dịch trolox bằng dung dịch mẫu. Mỗi dịch chiết được phân tích hai lần.
Tính kết quả theo cơng thức sau:
Khả năng kháng oxy hóa = X × V × f m × CKTS×
100 1000
Trong đó:
Khả năng kháng oxy hóa (mg TE/g CK) V : tổng thể tích dịch chiết mẫu (ml) f : hệ số pha loãng
m : khối lượng mẫu (g)
CKTS: Hàm lượng chất khô tổng số (%)
26
DPPH%: phần trăm kìm hãm gốc tự do DPPH
DPPH % = [1 − 𝑂𝐷𝑚ẫ𝑢
𝑂𝐷𝑐ℎ𝑢ẩ𝑛] × 100
ODchuẩn: độ hấp thụ quang của mẫu kiểm soát ODmẫu: độ hấp thụ quang của mẫu cần xác định.
Hình 3.3. Đường chuẩn Trolox
Đường chuẩn của các chất chuẩn trong phân tích khả năng kháng oxy hóa có dạng y = ax + b, với các đại lượng:
- y là giá trị % kìm hãm - x là nồng độ Trolox (µg/ml)
- Các hệ số a và b cho chất chuẩn như sau:
Từ giá trị % kìm hãm và đường chuẩn ta tính được nồng độ từng chất trong dịch chiết:
𝑥 = y − b a