PHẦN I : PROTEIN
5. Định lượng fructose trong dung dịch có lẫn đường khử khác
Muốn biết riêng hàm lượng của glucose và fructose, người ta phải định lượng fructose.Nếu hàm lượng các đường khử khác khơng đáng kể thì hàm lượng glucose bằng hiệu hàm lượng đường khử và hàm lượng fructose.Trước hết phải xác định lượng đường khử tổng số, sau đó mới xác định lượng fructose.
5.1 Nguyên tắc
Đầu tiên oxi hóa glucose và các đường khử khác bằng dung dịch kiềm của iôt
CH2OH(CHOH)4CHO+ I2 + 3NaOH = CH2OH(CHOH)4COONa + 2NaI + H2O
Trong điều kiện này, fructose khơng bị oxi hóa. Sau đó xác định fructose bằng phương pháp Bertrand hoặc phương pháp vi lượng.
• Hóa chất
Dung dịch iot 0,2N trong KI, dung dịch NaOH 0,2N, dung dịch NaOH 5%, dung dịch H2SO4 5%, dung dịch Na2SO3 5%, dung dịch methyl 0,02% (0,02g metyl đỏ(C15H15N3O2) 60 ml cồn, 40 ml nước)
Các thuốc thử dùng để xác định đường khử
5.2 Tiến hành
Cho vào bình nón 250ml 20ml dung dịch thí nghiệm (chứa khơng q 20 mg glucose. Trung hòa đến pH 6,5 – 7,0. Cho thêm 5ml dung dịch iot 0,2N và 2,5ml dung dịch NaOH 0,2N (thêm từng giọt).Giữ 15 phút ở nhiệt độ phòng.
Axit hóa dung dịch bằng 2ml H2SO4 5% và loại iot dư bằng dung dịch Na2SO35% (nhỏ từng giọt cho đến khi dung dịch mất màu vàng rơm).
Thêm vài giọt metyl đỏ và trung hịa hỗn hợp bằng NaOH 5%.Thể tích dung dịch thu được là Vđo. Dịch thu được chỉ chứa fructose. Phân tích fructose theo phương pháp Bertrand hoặc theo phương pháp vi lượng.
5.3 Tính kết quả
Nếu fructose được xác định theo phương pháp vi lượng thì hàm lượng đường được xác định theo công thức sau:
X = (a−b)20.f.W .V.3,3.V .Vđo1 . 100 (%) Trong đó:
a - số ml Na2S2O3 0,1N dùng chuẩn đội đối chứng, b - hệ số Na2S2O3 0,1N chuẩn độ mẫu thí nghiệm, f - hệ số chỉnh nồng độ của Na2S2O3 0,1N
3,3 - hệ số chuyển thành đường
V – tổng thể tích dịch chiết từm gam nguyên liệu (ml)
20 – lượng dung dịch thí nghiệm loại các đường khử khác (trừ fructose) V1– thể tích thí nghiệm (ml)
W – khối lượng nguyên liệu (g) 100 – hệ số chuyển thành %