Để 3 ống nghiệm trên ở nhiệt độ phịng thí nghiệm trong chính xác 30 phút sau đó dem đun cách thủy trong 10 phút.Ở từng ống nghiệm, hút ra 5ml hỗn hợp dung dịch cho vào một bình tam giác 250ml để xác định hàm lượng glucose
Xác định glucose: thêm vào mỗi bình tam giác 10ml dung dịch iodine 0,1N và 15ml NaOH 0,1N.
Số ống 1 2 3
Dung dịch saccharose 10% (ml) 0 10 10
Nước cất (ml) 10 0 0
Dịch enzyme (ml) 10 10 0
Dịch enzyme đã đun cách thủy 10 phút
Chú ý nhỏ chậm từng giọt NaOH vào sao cho thời gian nhỏ kéo dài khoảng 2 phút.Để yên trong bóng tối 20 phút.Lấy ra, thêm vào 2ml H2SO4 1N.Định phân lượng iodine thêm thừa bằng Na2S2O3 0,05N với hồ tinh bột 1% làm chất chỉ thị.Lặp lại thí nghiệm 2-3 lần
3.3 Tính kết quả
Hoạt độ của invertase được biểu thị bằng số mol saccharose bị thủy phân bởi lượng ezyme có trong 1g men bánh mì trong một phút ở nhiệt độ phịng thí nghiệm
(V1−V2). A .B
1000.20.2.a. b.t .m
Trong đó:
V1: số ml dùng để định phân dung dịch ở ống nghiệm 1 V2: số ml dùng để định phân dung dịch ở ống nghiệm 2 A: thể tích tổng cộng trong mỗi ống nghiệm (ml)
B: tổng thể tích dịch trích enzyme có được từ m (g) men bánh mì (ml) a: thể tích dung dịch đem xác định đường glucose (ml)
b: thể tích dịch trích enzyme cho vào mỗi ống nghiệm (ml) t: thời gian thủy phân (phút)
4 Khảo sát động học và xác định hoạt độ enyme urease4.1 Nguyên tắc 4.1 Nguyên tắc
Urease là một enzyme thủy phân đặc hiệu urea theo phản ứng:
Khi thêm formaldehyde vào môi trường sẽ tạo thành hexamethylene tetramine và giải phóng acid carbonic.
2(NH4)2CO3 + 6HCHO (CH2)6N4 +
2H2CO3 + 6H2O
Dùng dung dịch kiềm chuẩn định phân lượng acid tạo thành sẽ tính được lượng urea bị thủy phân.
Hóa chất
• Ure 2%, 1/3 M
• Formol trung tính: cho 10 ml dung dịch 10% formol và erlen, bổ sung 2 ml 0.5%phenolphtalein. Nhỏ từng giọt 0.2N NaOH vào erlen cho đến khi xuất hiện màu hồng nhạt của phenolphtalein. Ghi nhận lượng 0.2N NaOH đã sử dụng (V ml). Căn cứ tỉ lệ dung dịch 10% formol và 0.2N NaOH đã sử dụng, tiến hành điều chế 100 ml 10% formol trung hịa (khơng được sử dụng phenolphtalein).
• Phenolphthalein 1%: 1.0g phenolphtalein được pha với 50 ml ethanol và 50 ml nước cất.
4.2 Cách tiến hành
• Điều chế dung dịch urease
• Cân 10 g đậu nành đã được xay thành bột khuấy vào 150 ml, cho vào bình định mức 250ml, định mức tới vạch bằng nước cất. Lọc và thu dịch lọc.
• Khảo sát động học
Chuẩn bị 2 dãy ống nghiệm, mỗi dãy 6 ống. Ở từng dãy cho lần lượt các dung dịch vào theo bảng sau: