PHẦN I : PROTEIN
6. Định lượng tinh bột theo phương pháp thủy phân bằng acid
6.1 Nguyên tắc
Dưới tác dụng của acid, tinh bột bị thủy phân tạo thành đường glucose.Xác định hàm lượng glucose tạo thành rồi nhân với hệ số 0,9 ta được hàm lượng tinh bột.
(C6H10O5)n + nH2O nC6H12O6
162,1 18,02 180,12 F = 180,12162,1 =0,9
• Hóa chất
Dung dịch HCl 5%, dung dịch NaOH 5%, dung dịch Pbb(CH3COO)2 10% hoặc Pb(NO3)2 10%, dung dịch Na2SO4 hoặc NaHPO4 bão hòa.
Các thuốc thử dùng để xác định đường khử
6.2 Tiến hành
Cân 200-250g mẫu tinh bột đã nghiền nhỏ (đã biết độ ẩm), cho vào bình cầu dung tích 100ml. Cho thêm vào bình 50ml nước cất, lắc đều, giữ yên 30-45 phút, lọc, bỏ nước lọc để loại bỏ đường tan.
Rửa tinh bột bằng nước cất 2-3 lần. Chọc thủng giấy lọc và chuyển tinh bột vào bình cầu chứa 25ml dung dịch HCl 5%.Đậy kín bình bằng nút cao su có nắp ống làm lạnh hồi lưu.
Đun cách thủy hỗn hợp 3-5 giờ. Thử sự thủy phân hoàn toàn của tinh bột bằng dung dịch iot. Làm nguội, trung hòa hỗn hợp bằng dung dịch NaOH 5% đến pH 5,6-6,0 (bỏ trực tiếp mẫu giấy quỳcho vào bình).
Chuyển hỗn hợp vào bình định mức 100ml. Kết tủa protein bằng dung dịch chì axetat 10%. Loại bỏ chì axetat bằng dung dịch Na2SO4 hoặc NaHPO4 bão hòa. Thêm nước cất tới vạch mức, lắc đều và lọc.
Định lượng đường glucose trong dung dịch (lấy 5ml hoặc 10ml) bằng phương pháp Bertrand, qua đó tính được hàm lượng tinh bột.
6.3 Tính kết quả
Hàm lượng tinh bột được tính theo cơng thức sau:
X =a.VW .V.100 .0,91 Trong đó:
X – hàm lượng tinh bột tính bằng %
a – số mg glucose tra bảng tính được (ứng với số ml KMnO4 dùng chuẩn độ mẫu thí nghiệm trừ đi sốml KMnO4 dùng chuẩn độ mẫu đối chứng)
V1– thể tích dung dịch đường (sau khi thủy phân) lấy để xác định đường glucose (ml)
V – dung tích bình định mức
W – khối lượng mẫu thí nghiệm (mg) 100 – hệ số chuyển thành %;
0,9 – hệ số quy chuyển glucozo thành tinh bột