PHẦN I : PROTEIN
1. Định lượng lipid tổng trong mẫu rắn bằng phương pháp Soxhlet
1.1 Nguyên tắc
Dùng dung mơi kỵ nước trích ly hoàn toàn lipid từ nguyên liệu đã được nghiền nhỏ.Một số thành phần hịa tan trong chất béo cũng được trích ly theo bao gồm sắc tố, các vitamin tan trong chất béo, các chất mùi.Tuy nhiên, hàm lượng của chúng tương đối thấp. Do có lẫn tạp chất, phần trích ly được gọi là lipid tổng hay dầu thô.
Hàm lượng lipid tổng có thể tính bằng cách cân trực tiếp lượng dầu sau khi chưng cất loại sạch dung mơi hoặc tính gián tiếp tư khối lượng bã cịn lại sau khi trích ly hồn tồn lipid bằng dung mơi.
1.2 Quy trình thực hiện:
Sấy khô nguyên liệu đến khối lượng không đổi.Cân khoảng 5g nguyên liệu đã được nghiền nhỏ, cho vào túi giấy chuyên dùng cho bộ Soxhlet đã được sấy khô và biết khối lượng. Đặt túi giấy vào trụchiết.Lắp cốc chứa dung mơi vào các vị trí cố định trên thiết bị. Mở van cho nước lạnh vào ống sinh hàn.Bất công tắc bộ gia nhiệt và điều chỉnh nhiệt độ trích ly. Q trình trích ly có thể tiến hành theo 2 giai đoạn:
- Giai đoạn 1: nhúng toàn bộ trụ chiết chứa nguyên liệu vào cốc chứa dung môi, thời gian tiến hành là 2 – 3 giờ.
- Giai đoạn 2: kéo trụ chiết lên khỏi cốc dung mơi và tiếp tục trích ly bằng dung mơi đã hồn lưu.
Hình 5: Thiết bị chiết Soxhlet
1.3 Tính kết quả
Hàm lượng phần trăm chất béo tính theo cơng thức:
X = (M1– M2)*100/m Trong đó:
M1 là khối lượng túi giấy và mẫu ban đầu, g
M2: khối lượng túi giấy và mẫu sau khi trích lipid và sấy khô, g M: khối lượng mẫu ban đầu, g
2. Định lượng lipid tổng trong mẫu lỏng bằng phương pháp Adam Rose-Gottlieb 2.1 Nguyên tắc
Chất béo trong mẫu sữa được trích ly bằng cách bổ sung lần lược 4 dung môi khác nhau: amoniac, cồn, diethy ether và petroleum ether.Cồn và amoniac được dùng để kết tủa và loại protein ra khỏi các hạt cầu béo. Diethy ether được dùng để trích ly béo và các thành phần tan trong béo. Petroleum ether được bổ sung vào để trích ly béo và một lượng nhỏ các thành phần tan trong béo do petroleum ether là dung mơi trích ly có tính chọn lọc cao hơn so với diethyl ether.
Hỗn hợp sau khi bổ sung dung môi và khuấy đảo tách thành hai pha: pha nhẹ nằm ở trên gồm dung môi và béo, pha nặng nằm dưới gồm nước và các chất hòa tan trong nước. Ta thu pha nhẹ gồm dung môi và béo, làm bay hơi dung môi ta thu được tổng béo trong mẫu sữa.
Lấy 10mL dịch sữa cho vào erlen 250mL.Sau đó bổ sung lần lược 1.5 mL dung dịch NH3 và 10mL cồn.Lắc đều hỗn hợp trong 1 phút.Thêm từ từ 25mL diethy ether và lắc đều hỗn hợp trong 10 phút.Cuối cùng, 25mL diethy ether được bổ sung và hỗn hợp được lắc đều trong 10 phút.
Chuyển tồn bộ hỗn hợp sữa và dung mơi vào phễu chiết.Tráng erlen bằng petroleum ether nhiều lần nhằm trích ly hết béo cịn sót lại trên thành erlen.Cho toàn bộ hỗn hợp này vào phễu chiết và để quá trình tách lớp diễn ra tự nhiên trong 30 phút.Hỗn hợp sẽ tách thành 2 pha. Pha nhẹ là hỗn hợp gồm dung môi diethy ether, petroleum ether và béo, pha nặng gồm protein kết tủa, cồn, NH3và các thành phần còn lại trong sữa. Thu pha nhẹ và cho vào đĩa petri. Đạt đĩa petri vào trong tủ hút cho đến khi dung mơi bay hơi gần hết, sau đó cho đĩa petri này vào tủ sấy đang ở chế độ sấy 102 ± 1 0C.Sấy đến khối lượng không đổi (khoảng 1h). Sau đó đĩa petri chứa béo được làm nguội về nhiệt độ phịng và cân định lượng.
2.3 Tính tốn kết quả
Hàm lượng chất béo có trong 100mL dịch sữa được tính theo cơng thức sau:
TF = (M−mv).100 Trong đó:
TF (total fat): hàm lượng béo trong 100mL dịch sữa(g/100mL) M: khối lượng đĩa petri và béo sau khi sấy
m: khối lượng đĩa petri ban đầu v: thể tích sữa đem phân tích (10mL)