PHẦN I : PROTEIN
1. Caroten: Xác định caroten bằng phương pháp cột
1.1 Nguyên tắc
Tách caroten ra khỏi lương thực, thực phẩm bằng phương pháp sắc ký cột rồi đem so màu.Đầu tiên cho một lượng nhỏ chất phân tích vào đầu cột, cho tiếp xúc với vật liệu hấp thụ, cho pha động chạy qua cột. do các cấu tử có ái lực khác nhau với pha tĩnh nên chất nào có ái lực mạnh hơn với pha tĩnh thì sẽ bị giữ lại lâu hơn cịn những chất có ái lực yếu hơn sẽ bị pha động cuốn ra khỏi cột với vận tốc khác nhau.Sau đó lấy các cấu tử đã được tách ra đem so sánh với mẫu chuẩn.
Hóa chất:
• Cát tinh chế: đổ cát qua rây có đường kính lỗ 4 - 5mm. Rửa cát qua rây bằng nước máy, rồi dùng HCl( tỷ lệ 1/1) cho vào cát, khuấy kỹ, ngâm 1 đêm. Rủa cát cho tới hết axit. Rủa lại bằng nước cất, sấy khơ.
• Benzen: nhiệt độ sơi 70 – 80 0C. • Chất hấp phụ: nhơm oxit (Al2O3) • Natrisunfat khan (Na2SO4). • Dung dịch azobenzen tiêu chuẩn
1.2 Cách tiến hành.
Cân 5g mẫu lương thực, thực phẩm khô cho vào cối sứ nghiền kỹ với 5g cát sạch trong 30 phút. Để làm khô kỹ, ta cho thêm vào cối sứ 10g Na2SO4 khan nghiền tiếp hỗn hợp trong 30 phút nữa.
Phần dưới của cột sắc ký kỹ với 5g cát sạch trong 30 phút.Để làm khô kỹ, ta cho thêm được nhồi bơng thấm nước.Sau đó cột được nhồi nhơm oxyt khoảng 2/3 cột.Dùng đũa thủy tinh nén nhôm oxyt cho chặt.Trên cùng lại đặt 1 lớp bông dày 1cm.
Bột khô từ cối được chuyển vào phần trên của cột sắc ký.Cho bezen vào cột đến khi thấy lớp bột khơng thấm benzen nữa.Sau đó dùng bơm hút nhẹ để lớp bột được rữa chầm chậm bằng benzen đến khi khơng cịn thấy những giọt màu vàng chảy ra khỏi cột sắc ký vào bình hứng. cần chú ý cho bezen phủ ngập lớp bột vì caroten dễ bị oxy hóa bởi khơng khí.
Chuyển tồn bộ caroten từ bình hứng vào bình định mức dung tích 50ml hoặc 100ml (tùy thể tích nước hứng được) và thêm bezen đến vạch mức, lắc nhẹ. Dung dịch caroten này được đem so màu cùng với dung dịch azobenzen tiêu chuẩn (đã pha loãng 10 lần). Trong 1ml dung dịch có màu giống dung dịch azobenzen tiêu chuẩn chứa 0,00235 mg caroten.