PHẦN I : PROTEIN
5. Xác định hàm lượng chất béo bằng phương pháp Lolch
Hóa chất: Metlianol (CHOH); Dung dịch HCl 6N; Dung dịch KCl 0,37M (27,58g//); Cồn tuyệt đối 99". 5.1 Tiến hành
Cân 1 g mẫu phân tích đã nghiền nhỏ (nếu mẫu phán tích là chất rắn) hoặc lấy 2,5- 3ml (nếu mẫu phân tích là chất lỏng) vào cốc của máy li tâm (cốc có nút đậy).
Thêm vào đó 20ml hổn hợp CHCl3/CH3OH với li lệ 2:1 theo thể tích, lắc mạnh trong 1 phút (có thể lắc bằng máy khuấy từ hoặc máy đồng nhất), rồi thêm vào đó 80µl HCl 6N để yên ít nhất 2 giờ, sau đó thêm 4,2ml dung dịch KCl 0,37M, lắc mạnh rồi đưa vào máy li tâm quay khoảng 10 phút, lấy ra dùng pipet loại bỏ phần trên còn phần dưới cho vào đó 10 ml dung dịch H 2O/CH3OH/CHCl3, (dung dịch này pha sẵn theo tỉ lệ 47/48/3 theo thể tích), lắc mạnh rồi ly tâm, loại bỏ phần trên còn phần dưới lại cho 10 ml H2O/CH3OH/CHCl3 rồi lặp lại như trên lần 2.
Sau khi loại bỏ phần trên, phần còn lại cho vào phễu chiết, thêm vào đó một ít CHCl3, và nước cất lắc mạnh để lắng rồi thu hồi lấy phần dưới vào một bình cầu đã
cân sẵn để biết trọng lượng. Lại cho thêm CHCl3, và nước vào phần còn lại ở phếu chiết, lắc để thu hồi hết chất béo còn lại ở phần trên.
Phần dưới lại thu hồi vào bình cầu trên, sau đó lắp bình cầu vào một bộ cất chân không để cất đuổi CHCl3 sau đó cho ít cồn tuyệt đối vào bình cầu và cất cho đốn khơ. Phần cịn lại trong binh cầu chi là chất béo. Để bình cầu vào bình hút ẩm rồi cân (nếu trường hợp thấy trong bình cầu đục hoặc có cặn thì cho vào đó ít CHCl3, và lọc qua lớp bột amiăng, cát, bông thuỷ tinh rồi rnới cất đổ tách hết CHCl3).
5.2 Tính kết quả
Hàm lượng chất béo theo % tính bằng cơng thức sau:
X% = G2−GG 1.100
Trong đó:
G1: trọng lượng bình cầu chứa chất béo (g) G2: trọng lượng bình khơng (g)
G: trọng lượng mẫu phân tích (g)