Để có thể tách chiết và thu nhận enzyme chitinase hiệu quả, bố trí thí nghiệm để xác định dung môi thích hợp sử dụng chiết enzyme. Sau khi đã lựa chọn được dung môi chiết thích hợp, tiến hành tối ưu tỉ lệ dung môi chiết/nguyên liệu và thời gian chiết.
Xác định sự ảnh hưởng của dung môi chiết tới hoạt độ của enzyme, tiến hành thí nghiệm để chọn dung môi chiết enzyme thích hợp như sau: Lá khoai lang tươi được xay nhỏ, enzyme trong lá được chiết bằng các dung môi khác nhau: nước cất, dung dịch muối sinh lý và đệm acetat pH = 5. Tiến hành chiết trong điều kiện nhiệt độ 5 – 100C. Tỉ lệ dung môi/nguyên liệu = 1/1, thời gian chiết 15 phút. Dịch chiết được lọc thô qua vải lọc để tách bã. Tiến hành ly tâm lạnh dịch lọc ở nhiệt độ 50C với tốc độ 9000 vòng/ phút. Loại bỏ phần bã để thu phần dịch có chứa enzyme. Xác định hoạt độ enzyme DC thu được từ đó lựa chọn dung môi chiết thích hợp.
Sau khi lựa chọn được dung môi thích hợp cho quá trình chiết rút enzyme, tiến hành tối ưu tỷ lệ dung môi/nguyên liệu và thời gian chiết. Đối với thông số tỷ lệ dung môi chiết/nguyên liệu, bố trí thí nghiệm với các tỷ lệ khác nhau: 0,5/1; 0,75/1; 1/1; 1,25/1; 1,5/1; 1,75; 2/1. Xác định hoạt độ enzyme DC ở các tỷ lệ khác nhau qua đó lựa chọn tỷ lệ dung môi chiết/nguyên liệu thích hợp.
Thí nghiệm được bố trí để xác định ảnh hưởng của thời gian chiết đến hoạt độ enzyme chitinase DC. Thí nghiệm với các thời gian chiết khác nhau: 0; 5; 10; 15; 20; 25; 30; 35; 40 phút. Xác định hoạt độ enzyme DC thu được với thời gian khác nhau từ đó lựa chọn được thời gian chiết thích hợp [2], [6], [8], [15], [24].
Để nghiên cứu lựa chọn dung môi chiết thích hợp và tối ưu quá trình chiết, thí nghiệm được bố trí theo sơ đồ sau:
Lá khoai lang
Xay nhỏ
Chiết enzyme
Chọn loại dung môi thích hợp
Nước cất DD muối sinh lý Đệm acetat pH=5
Tối ưu tỉ lệ dung môi/nguyên liệu và thời gian chiết
Tỉ lệ dung môi/nguyên liệu Thời gian chiết
Lọc qua vải lọc Loại bã
Ly tâm
Dịch chiết enzyme
Xác định hoạt độ enzyme DC
Lựa chọn dung môi, tỉ lệ và thời gian chiết