4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 1 Hồ sơ thu thập mẫu
4.6.1Khả năng gây bệnh tắch tế bào của virus Care
Sau khi phân lập virus từ các mẫu bệnh phẩm, chúng tôi tiến hành tìm hiểu sâu về khả năng gây bệnh tắch tế bào của virus Care. Ở bước nghiên cứu này, chúng tôi không chỉ tiến hành với những virus Care phân lập ựược mà còn ựồng thời tiến hành ựối với cả chủng virus vắc xin Onderstepoort. Mục ựắch của việc làm này là nhằm so sánh ựược những ựặc ựiểm của virus Care phân lập với virus vắc xin về sự nhân lên trên môi trường tế bào Vero-DST.
để ựánh giá một cách khách quan ựặc tắnh sinh trưởng, phát triển của virus, ựầu tiên, các huyễn dịch chứa virus ựược ựem hiệu giá ựể tắnh toán giá trị TCID50 (phương pháp cụ thể ựã trình bày ở phần 3.4.7). Sau ựó mới ựem gây nhiễm lên môi trường tế bào Vero-DST ở cùng một tỷ lệ là MOI = 0,01.
Cụ thể, chúng tôi chuẩn bị một khay 96 giếng tế bào Vero-DST, tế bào ựã mọc ựều kắn 1 lớp trên bề mặt nuôi cấy. Số lượng tế bào trong một giếng của khay ựược xác ựịnh bằng cách ựếm 4 giếng ựại diện ở 4 góc của khay 96 và tắnh trung bình. Sau ựó, huyễn dịch chứa virus ựược ựưa vào gây nhiễm cho các giếng tế bào theo lượng thắch hợp ựể ựảm bảo MOI = 0,01. Khay tế bào gây nhiễm virus ựược ủ ở 370C/5% CO2 ựể theo dõi CPE qua các thời ựiểm 6 giờ, 12 giờ, 24 giờ, 36 giờ, 48 giờ, 60 giờẦ sau khi gây nhiễm cho
ựến khi CPE không còn phát triển thêm trên các giếng tế bào nữa.
Kết quả theo dõi sự nhân lên của các virus phân lập qua sự phát triển bệnh tắch tế bào trên môi trường tế bào Vero-DST ựược thể hiện ở bảng 4.7.
Bảng 4.7. Bệnh tắch tế bào khi gây nhiễm virus Care
Mẫu CDV20-R CDV21-H CDV22-P CDV23-P CDV24-H Ond 6h - - - - 12h * * - * - * 24h 40% 30% * 30% * 40% 36h 60% 45% 25% 50% 20% 55% 48h 90% 85% 50% 85% 40% 85% 60h 100% 100% 80% 100% 70% 100% 72h B B 100% B 95% B CPE 96h B B B B B B Chú thắch: CDV20-R, CDV21-H, CDV22-P, CDV23-P, CDV24-H là kắ hiệu mẫu virus phân lập ựược từ ruột của chó C20, hạch lympho của chó C21, C24; phổi của chó C22,C23.
Ond: chủng virus vắc xin Onderstepoort - : không có bệnh tắch tế bào
* : bệnh tắch tế bào dưới 10%
B: tế bào bong tróc khỏi bề mặt nuôi cấy
Phân tắch bảng 4.7, dễ dàng nhận thấy mẫu virus phân lập từ chó C20, C21, C23 có ựặc ựiểm sinh trưởng, phát triển tương ựối giống nhau và giống với chủng Onderstepoort. CPE xuất hiện sớm nhất ở 3 chủng virus Care phân lập là CDV20-R, CDV21-H, CDV23-P (12 giờ sau khi gây nhiễm). Quan sát ở 12 giờ tiếp sau khi bắt ựầu xuất hiện CPE (thời ựiểm 24 giờ sau gây nhiễm), mức ựộ CPE ựã ựạt từ 30% (CDV21-H, CDV23-P) ựến 40% (CDV20-R và
Onderstepoort). Sau 48 giờ, CPE ựều ựạt 85%- 90%, hầu hết các tế bào ựã bị phá hủy hoàn toàn, thậm chắ nhân cũng ựang dần biến mất, chỉ còn một hai nhóm nhỏ các tế bào còn bám trên bề mặt nuôi cấy. 100% CPE ựược ghi nhận ở 60 giờ, không còn cụm tế bào nào bám ựáy, các tế bào ựều ựã tan vỡ bong tróc khỏi bề mặt nuôi cấy, màng tế bào và nhân bị dồn thành cụm trước ựây cũng tan vỡ và bong tróc.
Ngược lại với các virus Care phân lập ựược từ chó C20, C21, C23, virus phân lập ựược từ chó C22, C24 (CDV22-P, C24-H) lại quan sát thấy CPE muộn hơn (CPE xuất hiện tại thời ựiểm 24 giờ sau khi gây nhiễm) và tăng chậm trong các thời gian tiếp theo. Sau 48 giờ, CPE do 2 chủng này gây ra mới chỉ ựạt ở mức 40 % và 50% ắt hơn hẳn so với mức CPE ựược gây ra bởi CDV20-R, CDV21-H, CDV23-P và Onderstepoort (85% và 90%). 100% CPE ựược ghi nhận ở thời ựiểm 72 và 96 giờ sau khi gây nhiễm virus, chậm hơn 12- 24 giờ so với 4 virus còn lại (CDV20-R, CDV21-H, CDV23-P, Onderstepoort).
Như vậy, có thể thấy khi gây nhiễm virus trên môi trường tế bào Vero- DST, CDV22-P, CDV24-H phân lập từ C22 và C24 tạo ra CPE muộn hơn chủng virus vắc xin Onderstepoort và các virus phân lập từ các chó C20, C21, C23. đồng thời mức ựộ phát triển CPE trong thời gian sau khi xuất hiện CPE của CDV22-P, CDV24-H cũng chậm hơn. Theo dõi cùng với các bảng triệu chứng và bệnh tắch của các chó cho thấy: C22, C24 có biểu hiện các triệu chứng và bệnh tắch nhẹ hơn so với C20, C21, C23. Có thể do số lượng và ựộc lực của virus ở C22, C24 ắt hơn và thấp hơn so với các chó còn lại nên chúng gây ra bệnh tắch tế bào và biến ựổi bệnh lý trên cơ thể chó nhẹ hơn.