3. đỐI TƯỢNG NỘI DUNG VẬT LIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.3Phương pháp làm tiêu bản vi thể
Từ những mẫu bệnh phẩm có các biến ựổi ựại thể cần tiến hành làm tiêu bản ựể xác ựịnh bệnh tắch vi thể chủ yếu của bệnh. Phương pháp làm tiêu bản vi thể theo quy trình tẩm ựúc bằng parafin, nhuộm Haematoxilin - Eosin (HE). Các bước của quá trình làm tiêu bản vi thể như sau:
Cố ựịnh bệnh phẩm
Ngâm miếng tổ chức vào dung dịch formol 10% ựến khi bệnh phẩm ỘchắnỢ.
Vùi bệnh phẩm
Tiến hành lần lượt các bước sau:
Rửa formol: Rửa bệnh phẩm dưới vòi nước chảy nhẹ trong 24h. đưa mẫu vào hệ thống máy chuyển ựúc mẫu tự ựộng.
Hệ thống máy chuyển ựúc mẫu tự ựộng gồm 12 bình
Bình Hóa chất Thời gian
(giờ) 1 Cồn 600 1: 00 2 Cồn 600 1: 00 3 Cồn 700 1: 30 4 Cồn 800 1: 30 5 Cồn 960 1: 30 6 Cồn 1000 1: 30 7 Cồn 1000 1: 30 8 Cồn 1000 1: 30 9 Xylen 1: 30 10 Xylen 1: 30 11 Parafin 2: 00 12 Parafin 2: 00 đúc block
đúc mẫu bệnh phẩm trong parafin.
Cắt dán mảnh và cố ựịnh tiêu bản
Cắt mảnh: bằng máy microtom.
Tãi mảnh: Dàn lát cắt bằng phẳng trên phiến kắnh trong nước ấm 480C. Sau ựó ựể tủ ấm 370C ựến khi bệnh phẩm khô là có thể ựem nhuộm ựược.
Nhuộm tiêu bản
Các bước tiến hành
+ Khử parafin: Cho tiêu bản qua hệ thống xylen gồm 3 lọ:
Xylen I: 6h
Xylen II: 6h
Xylen III: 12h
+ Khử xylen: Cho tiêu bản qua hệ thống cồn gồm 4 lọ: Cồn tuyệt ựối : 2 lần (mỗi lần 1 phút)
Cồn 950: 1 lần
Cồn 700: 1 lần
Cồn 500: 1 lần
+ Khử cồn: để tiêu bản dưới vòi nước chảy 15 phút. + Nhuộm Haematoxylin (nhuộm nhân)
Nhỏ haematoxylin ngập tiêu bản trong 5 phút, rửa nước, quan sát, kiểm tra sự bắt màu của tổ chức, nếu thấy bắt màu xanh tắm than là ựược. Nếu màu quá nhạt thì rửa nước và nhuộm lại. Nếu màu ựậm quá thì nhúng nhanh tiêu bản qua dung dịch cồn chlohydric.
Sau ựó cho tiêu bản qua hệ thống cồn:
Cồn 500: 1 lần
Cồn 700: 1 lần
Cồn 950: 1 lần
Cồn tuyệt ựối: 2 lần Rửa tiêu bản
+ Nhuộm Eosin (nhuộm bào tương) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Nhỏ Eosin ngập tiêu bản khoảng 5-10 phút, rửa nước. Cho tiêu bản qua hai lọ cồn tuyệt ựối mỗi lọ 1 phút. + Tẩy cồn, làm trong tiêu bản: Cho tiêu bản ựi qua xylen .
Gắn lamen
Nhỏ một giọt Baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lên tiêu bản khi vẫn còn xylen trên tiêu bản. Kiểm tra tiêu bản trên kắnh hiển vi quang học.