Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tạo nguyên liệu cho quá trình chuyển gen
3.2.1. Thí nghiệm B1: Ảnh hưởng của các loại nguyên liệu đến khả năng chuyển gen tạo rễ tơ.
3.2.1. Thí nghiệm B1: Ảnh hưởng của các loại nguyên liệu đến khả năng chuyển gen tạo rễ tơ. chuyển gen tạo rễ tơ.
Ở thí nghiệm này ta tiến hành khảo sát ảnh hưởng của mẫu nguyên liệu đến khả năng cảm ứng tạo rễ tơ. Kết quả tỉ lệ tạo rễ tơ thu được sau 5 tuần được thể hiện qua biểu đồ sau.
Hình 3.14. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của các loại nguyên liệu đến khả năng tạo rễ tơ
Qua kết quả thí nghiệm ta thấy khả năng cảm ứng tạo rễ tơ đối với các loại mẫu nguyên liệu là rất khác nhau. Đối với mẫu thân rễ tơ được hình thành ở một số mẫu sau 10 ngày lây nhiễm, sau 5 tuần thì tỉ lệ mẫu thân tạo rễ tăng lên với cao 52,61%, rễ phát triển nhanh, phân nhánh nhiều. Đối với quá trình lây nhiễm vào mẫu lá thì không có hiện tượng tạo rễ tơ, tất cả mẫu lá đều chuyển sang màu vàng và chết hoàn toàn sau 4 tuần đặt lên môi trường diệt khuẩn. Các mẫu mô sẹo cũng có khả năng cảm ứng tạo rễ tơ nhưng sự tạo rễ tơ rất chậm (4 tuần sau khi lây nhiễm) và với tỉ lệ thấp 22,52 %.
Hình 3.15. Các mẫu thân, lá, mô sẹo chuyển gen sau 4 tuần theo dõi: a) Rễ phát sinh từ thân; b) Lá chết sau 4 tuần; c) Rễ phát sinh từ mô sẹo
Quá trình tạo thành rễ tơ của các mẫu thân chuyển gen ban đầu ở mẫu có các khối u trong suốt có hình cầu xuất hiện khoảng 7-10 ngày sau khi lây nhiễm (Hình 3.11b), rễ tơ bắt đầu nổi lên từ các khối u, chúng bắt đầu phát triển thêm những lông tơ màu trắng đục mọc bao quanh toàn bộ rễ sau khoảng 5-7 ngày tiếp theo (Hình 3.11c). Sau đó rễ tơ tiếp tục phát triển và phân nhánh rất mạnh. Quá trình hình thành rễ tơ ở mô sẹo cũng xảy ra tương tự.
a b c
Hình 3.16. Quá trình hình thành rễ tơ từ mẫu thân được chuyển gen: a) mẫu ban đầu mới chuyển gen. b, c, d: rễ tơ hình thành ở các giai đoạn 10, 15, 30 ngày sau khi chuyển gen.
Hình 3.17. Sự hình thành rễ tơ của mô sẹo sau khi chuyển gen: a) Sự hình thành khối u hình cầu; b) Sự tạo thành rễ tơ xung quanh rễ.
Quan sát dưới kính hiển vi soi nổi, rễ được hình thành trên các mẫu, rễ có nhiều lông tơ xuất hiện bao quanh thân rễ nên người ta còn gọi rễ chuyển gen là rễ tơ, nó khác hoàn toàn so với rễ bình thường không có nhiều lông tơ. Rễ tơ phát triển mạnh không tuân theo tính hướng địa giống rễ bình thường, về hình thái bên ngoài thì chúng có nhiều lông tơ bao quanh và có màu trắng đục.
c d
Như vậy theo kết quả thí nghiệm mẫu thích hợp cho quá trình chuyển gen đối với chủng TR105 là mẫu thân. Vì vậy chúng tôi chọn mẫu thân để thực hiện các thí nghiệm chuyển gen tiếp theo với điều kiện là mật độ OD và thời gian lây nhiễm.