Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tạo nguyên liệu cho quá trình chuyển gen
3.2.3. Thí nghiệm B3: Ảnh hưởng của thời gian lây nhiễm đến khả năng chuyển gen tạo rễ tơ
chuyển gen tạo rễ tơ
Thời gian lây nhiễm hay là khoảng thời gian mẫu mô được ngâm trực tiếp trong dịch huyền phù vi khuẩn. Thời gian lây nhiễm ảnh hưởng lớn đến khả năng xâm nhiễm của vi khuẩn cũng như sức sống của mô. Thời gian lây nhiễm càng kéo dài thì càng ảnh hưởng đến sức sống của mẫu mô, do lượng vi khuẩn xâm nhiễm vào mô càng lớn thì khả năng diệt khuẩn càng kém và làm tăng khả năng khả năng vi khuẩn vi khuẩn phát triển lại và gây chết mẫu. Trái lại, khi thời gian lây nhiễm ngắn, lượng vi khuẩn xâm nhập ít, làm giảm khả năng chuyển gen.
Qua quá trình thí nghiệm với mẫu nguyên liệu là thân cây sâm dây, với mật độ OD là 0,25; thời gian lây nhiễm là 10 phút, 15 phút và 20 phút; thời gian đồng nuôi cấy hai ngày ta thu được kết quả được hiển thị ở biểu đồ sau như sau:
Hình 3.19. Biểu đồ thể hiện ảnh hưởng của thời gian lây nhiễm đến khả năng chuyển gen tạo rễ tơ
Qua biểu đồ ta thấy với thời gian lây nhiễm là 15 phút thì có tỉ lệ mẫu được chuyển gen là cao nhất 45,24 %.
Tiến hành thí nghiệm đối với đĩa đối chứng gồm những mẫu đoạn thân không lây nhiễm với vi khuẩn A.rhizogenes và một đĩa gồm những mẫu thân lây nhiễm với vi khuẩn A.rhizogenes với OD 0,25 và thời gian lây nhiễm 15 phút. Quan sát sau 2 tuần chúng tôi thấy ở đĩa đối chứng thì các mẫu thân có hiện tượng phồng xốp và chết, còn đối với đĩa có mẫu đã lây nhiễm thì có sự cảm ứng tạo rễ tơ ( hình 3.15).
Hình 3.20. Cảm ứng tạo rễ tơ: a) Đĩa đối chứng; b) Đĩa có mẫu lây nhiễm với khuẩn A.rhizogenes