Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 2.1 Thời gian và địa điểm tiến hành thí nghiệm
2.3.2.1. Thí nghiệm B1: Ảnh hưởng của các loại nguyên liệu đến khả năng tạo rễ tơ
sâm dây
Để thành công cho việc chyển gen tạo rễ tơ ở một số lồi thực vật thì phải xét một số điều kiện cần thiết như : các chủng vi khuẩn Agrobacterium rhizogenes, mẫu cấy thích hợp, loại kháng sinh thích hợp để loại bỏ vi khuẩn sau khi lây nhiễm và loại môi trường nuôi cấy phù hợp. Hầu hết các loại nguyên liệu thực vật như lá, thân, cuống lá, lá mầm, củ, rễ… đều có thể sử dụng để tạo rễ tơ [17 ].
Tuy nhiên đối với các lồi khác nhau vật liệu thích hợp để chuyển gen tạo rễ tơ, và độ tuổi vật liệu là khác nhau. Để tạo ra rễ tơ ta thực hiện lây nhiễm mẫu nguyên liệu đã tạo vết thương với vi khuẩn A.rhizogenes, hoặc tiêm trực tiếp vi khuẩn vào nguyên liệu, đồng nuôi cấy trong 2 ngày. Sau 2 ngày các mẫu cấy được chuyển qua mơi trường có chứa kháng sinh để tiêu diệt vi khuẩn.
Trong nghiêm cứu này tôi tiến hành thử nghiệm khả năng lây nhiễm của chủng TR105 với các mẫu ngun liệu là thân, lá và mơ sẹo. Sau đó thử nghiệm với mật độ khuẩn OD và thời gian lây nhiễm, để tìm ra được điều kiện tạo rễ tơ thích hợp cho cây sâm dây.
2.3.2.1. Thí nghiệm B1: Ảnh hưởng của các loại nguyên liệu đến khả năng tạorễ tơ rễ tơ
Nguồn nguyên liệu thực vật phục vụ cho quá trình chuyển gen là một yếu tố quan trọng hàng đầu cần khảo sát kỹ lưỡng. Khả năng chuyển gen có thành cơng hay khơng phần lớn phụ thuộc vào mẫu biến nạp. Do đặc tính khác nhau của mỗi loại mẫu nên tỷ lệ chuyển gen cũng biến thiên theo từng loại mẫu thực vật. Do đó, thí nghiệm xác định nguồn vật liệu được thực hiện ngay đầu tiên trong q trình chuyển gen. Qua thí nghiệm này tơi tiến hành thử nghiệm chuyển gen tạo rễ tơ đối với các loại mẫu nguyên liệu là thân, lá và mô sẹo của cây sâm dây.