Sơ đồ bố trí thí nghiệm nghiên cứu về enzyme nội tạng cá Chẽm

Một phần của tài liệu Nghiên cứu thu nhận enzyme protease từ nội tạng cá chẽm (lates calcarifer) và thử nghiệm ứng dụng để sản xuất bột cá thực phẩm (Trang 39 - 43)

Do các enzyme khi còn nằm trong tế bào thường ở dạng chưa hoạt động (zimogen) nên cần phải hoạt hóa enzyme. Năng lượng hoạt hóa cần cho cho quá trình hoạt hóa enzyme là nhiệt lượng cung cấp từ môi trường bằng cách ủ. Mỗi enzyme cần có một chế độ ủ thích hợp cho quá trình hoạt hóa.

Để xác định nhiệt độ ủ và thời gian ủ thích hợp cho hoạt hóa enzyme, tiến hành thí nghiệm theo sơ đồ sau:

10 30 ... 60 70 Ủ ở các nhiệt độ(00C) khác 25 30 … 55 60

Chọn nhiệt độ và thời gian ủ thích hợp

Ủ ở topt với các thời gian (phút)

Chiết rút bằng dung môi

Ly tâm lạnh

Xác định hoạt tính protease Nghiền nhuyễn Nội tạng cá Chẽm

29

2.2.2.2. Nghiên cứu chọn dung môi chiết

Xác định dung môi chiết thích hợp

Tiến hành chiết rút enzyme bằng các dung môi: nước cất, nước muối sinh lý, đệm phosphat 0,03M (pH=7), tỷ lệ 1/1, sau đó ly tâm lạnh, thu dịch chiết. Xác định hoạt tính protease từng dịch chiết, so sanh, chọn dung môi thích hợp. Bố trí thí nghiệm như sau:

Chiết bằng các dung môi

Nước cất Nước muối sinh lý Đệm phosphate (pH 7)

Xác định hoạt tính protease của DC Chọn chọn dung môi thích hợp Nghiền nhuyễn và ử với nhiệt độ,

thơì gian thích hợp Nội tạng cá Chẽm

30

Xác định tỷ lệ dung môi chiết và nguyên liệu thích hợp

Sau khi chọn được dung môi thích hợp, xác định tỷ lệ dung môi chiết và nguyên liệu. Bố trí thí nghiệm như sau:

2.2.2.3. Nghiên cứu chọn tác nhân kết tủa thu CPE

Xác định tác nhân kết tủa

Tiến hành tủa enzyme bằng các tác nhân: aceton 70%, ethanol 70%, (NH4)2SO4 70% trong thời gian 30 phút, nhiệt độ 4oC, sau đó ly tâm lạnh thu tủa, xác định hoạt tính protease. Bố trí thí nghiệm như sau:

Chiết bằng bằng dung môi thích hợp với các tỷ lệ

1/1 1,5/1 4/1

Xác định hoạt độ protease của DC Chọn chọn tỷ lệ dung môi thích hợp

Nghiền nhuyễn và ử với thời gian, nhiệt độ thích hợp Nội tạng cá Chẽm 3/1 …. Aceton Kết tủa lạnh bằng các tác nhân kết tủa: Ammonium suphate Ethanol

Xác định hoạt tính protease của CPE Chọn tác nhân kết tủa thích hợp

31

Xác định nồng độ tác nhân kết tủa

Tiến hành chọn nồng độ tủa ở các nồng độ: 40, 50, 60, 70, 80, 90% trong thời gian 30 phút, nhiệt độ 4oC sau ly tâm lạnh, thu tủa, xác định hoạt tính protease. Bố trí thí nghiệm như sau:

Xác định thời gian kết tủa

Tiến hành tủa protease lần lượt thời gian là: 15, 20, 30, ...120 phút, xác định hoạt tính protease. Bố trí thí nghiệm mhư sau:

DC

Kết tủa bằng tác nhân tủa thích hợp ở các nồng độ khác nhau

40% 50% … 80% 90%

Xác định hoạt độ protease của các CPE

Chọn nồng độ tác nhân kết tủa thích hợp

DC

Kết tủa lạnh với aceton nồng độ thích hợp ở thời gian: (phút)

15 30 … 115 120

Xác định hoạt tính protease của các CPE Chọn thời gian kết tủa thích hợp

32

Một phần của tài liệu Nghiên cứu thu nhận enzyme protease từ nội tạng cá chẽm (lates calcarifer) và thử nghiệm ứng dụng để sản xuất bột cá thực phẩm (Trang 39 - 43)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(117 trang)