1.7. Thử nghiệm độc tính tế bào (cytotoxicity test)
An tồn dược phẩm là yếu tố cực kỳ quan trọng. Việc thử nghiệm độc tính tế bào là bước đầu không thể thiếu đối với việc nghiên cứu 1 loại vật liệu dẫn truyền thuốc[32, 52, 53].
Thử nghiệm SRB (Sulforhodamine B) là một phương pháp so màu đơn giản và nhạy để xác định độc tính tế bào của một chất. SRB là một thuốc nhuộm tích điện âm sẽ liên kết tĩnh điện được với các phần tích điện dương của protein. Lượng thuốc nhuộm liên kết sẽ phản ánh lượng protein tổng của tế bào.
Trong thử nghiệm, tế bào được cố định, rửa và nhuộm với SRB. Sau đó SRB liên kết với protein tế bào được hòa tan tạo dung dịch trong suốt có màu hồng. Mật độ quang đo được của dung dịch tương quan với lượng protein tổng hay số lượng tế bào. Sự thay đổi lượng tế bào so với mẫu chứng phản ánh độc tính tế bào của chất nghiên cứu.
CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM2.1. Hóa chất và thiết bị 2.1. Hóa chất và thiết bị
2.1.1. Hóa chất
Bảng 2.1. Tên hóa chất và nơi xuất xứ
Tên hóa chất Xuất xứ
Cetyltrimethylamnonium bromide (CTAB) Merck
1-Ethyl-3-(3-dimethylami
nopropyl)carbodiimide hydrochloride (EDC)
Merck
Tetraethyl orthosilicate (TEOS) Merck
Gelatin Chitosan
Merck
Acid acetic Trung Quốc
Succinic anhydride Merck
Diethyl ether Merck
(3-aminopropyl)triethoxy silane (APTES) 3-glycidoxypropyltrimethoxysilane
Merck
Ethanol Tây Ban Nha
Tetrahydrofuran Merck
Màng cellulose 6000-8000 và 3000-5000 Da Merck
Dithiodipropionic acid (DTDP) Merck
4-Nitrophenyl chloromate Merck
Doxorubicin (DOX) Fluorouracile (5-FU) Sodium hydroxide Acid clohydric Merck Merck Trung Quốc Trung Quốc
Vỏ trấu sạch Miền Tây
2.1.2. Dụng cụ
Máy đánh siêu âm UP200Ht Máy cô quay Strike 300
Máy khuấy từ gia nhiệt Cân điện tử EB35B-Pro
Tủ sấy KETDNG 101 Máy tạo khí N2
Máy li tâm Máy đo pH AB15
Bình tam giác, cốc thủy tinh Phễu lọc, bình cầu
Phễu chiết, ống đong
Máy đo UV-vis
Giấy đo pH, giấy lọc.
2.2. Thực nghiệm
2.2.1. Tổng hợp nano silica xốp và tạo cầu nối biến tính
2.2.1.1. Tổng hợp vật liệu nano silica xốp (PNS) bằng phương pháp sol-gel[54]
Nano silica xốp (porous nano silicas) được tổng hợp bằng phương pháp sol-gel sao cho kích thước hạt đồng đều dưới 100 nm. Sử dụng chất hoạt động bề mặt Cetyltrimethylamonium bromide (CTAB) như một tác nhân định hình cấu trúc lỗ xốp cho vật liệu nano, đây cũng có thể xem là khung sườn để TEOS có thể thủy phân và bao lấy tạo điều kiện cho việc hình thành các hạt nano silica xốp sau này.
Hình 2.1. Mơ tả qui trình tổng hợp Porous nano silica (PNS)
Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng tổng hợp này như nhiệt độ, tốc độ khuấy, xúc tác, hàm lượng tetraethyl orthosilicate (TEOS), lượng nước...
Trên cơ sở đó, chúng tơi tiến hành khảo sát kích thước hạt dựa trên lượng NH3, TEOS, ethanol với tốc độ khuấy khoảng 350 vịng/phút, nhiệt độ 60oC.
Hình 2.2. Sơ đồ qui trình tổng hợp nano silica xốp (PNS) bằng phương pháp sol-gel2.2.1.2. Tổng hợp vật liệu nano silica xốp bằng phương pháp kết tủa [55]