CHƢƠNG II : VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp
2.2.2. Các phương pháp phân tích hóa lý, hóa sinh [6]
2.2.2.1. Phương pháp phân tích axit tổng số. Nguyên tắc:
Dựa trên phản ứng trung hịa các axit có trong mẫu bằng dung dịch kiềm NaOH 0,1 N với chất chỉ thị là phenolphtalein. Từ lượng NaOH tiêu hao tính được lượng axit tổng số có trong mẫu (khơng tính lượng axit cacbonic và SO2 tự do và liên kết có trong mẫu).
Luận văn Thạc sĩ Sinh học Phạm Thị Hậu
Dung dịch NaOH 0,1N, Phenolphthalein 1%. Tiến hành:
Lấy 1ml mẫu cho vào bình tam giác 250ml, sau đó cho thêm 9ml nước cất, thêm 3 giọt phenolphthalein 1%. Rồi chuẩn bằng dung dịch NaOH 0,1N tới khi dung dịch chuyển sang phớt hồng thì dừng lại. Dùng cơng thức sau để tính lượng axit tổng số:
Nồng độ axit tổng số: X(%) = .100
Trong đó: X: nồng độ axit tổng số (% axit axetic).
k: hệ số axit axetic tương ứng với 1ml NaOH 0,1N (k=0,006) V: thể tích NaOH tiêu tốn khi chuẩn độ (ml).
v: thể tích dịch mẫu lấy đi chuẩn độ (ml).
2.2.2.2. Phương pháp xác định đường bằng phương pháp Ferixianua Kali
Nguyên tắc:
Dung dịch kali ferixyanua trong môi trường kiềm, dưới tác dụng của nhiệt độ cao sẽ giải phóng ra oxi nguyên tử, oxi nguyên tử sẽ oxi hóa đường thành axit. Phản ứng được thực hiện khi đun nóng với chỉ thị xanh metylen. Điểm kết thúc phản ứng xanh metylen chuyển từ màu xanh sang tím hồng rồi vàng rơm.
Phương pháp này được thực hiện nhờ phản ứng sau: 2K3Fe(CN)6 + 2KOH → 2K4Fe(CN)6 + H2O + O Tiếp theo oxi nguyên tử sẽ oxi hóa đường để tạo thành axit: CH2OH(CHOH)4CHO + 2O → HOOC(CHOH)4COOH Phương trình tổng quát của phản ứng:
2K3Fe(CN)6 + 2KOH + CH2OH(CHOH)4CHO → 2K4Fe(CN)6 + 2H2O + HOOC(CHOH)4COOH
Tiến hành:
Muốn xác định được lượng đường tổng số ta phải chuyển đường kép trong dịch quả (saccharose) thành đường đơn (đường khử). Thủy phân dịch quả ở 70-800 C
Luận văn Thạc sĩ Sinh học Phạm Thị Hậu
trong môi trường axit HCl trong 20 phút. Sau đó trung hịa bằng NaOH 10% rồi đem định lượng. Dùng pipet lấy 20 ml Ferixianua 1% cho vào bình tam giác 250ml + 5ml KOH 2,5N và 3 giọt xanh metylen, lắc đều và đun sơi trong 1-2 phút. Sau đó, dùng dung dịch đường để chuẩn tới khi màu xanh metylen chuyển sang vàng rơm.
Hàm lượng đường tổng D(%) = .100
Trong đó: m: Số dịch đường tiêu hao khi chuẩn độ (ml). f : hệ số pha loãng.
100: hệ số quy đổi ra 100ml.
a: Lượng đường glucose tương ứng với 20 ml Ferixianua 1% và 5ml KOH 2,5N.
Để xác định a ta làm như sau: Cân 0,5(g) glucose đã sấy đến trọng lượng không đổi hịa tan trong nước cất rồi cho vào bình định mức 100ml, ta có dung dịch glucose chuẩn chứa D = 0,5%. Lấy dung dịch này làm dung dịch chuẩn để chuẩn dung dịch 20ml Ferixyanua 1%và 5ml KOH 2,5N. Giả sử số ml đường glucose chuẩn được là a0 thì a được tính theo cơng thức là: a= a0 × 0,005.
2.2.2.3. Phương pháp phân tích hàm lượng etylic
Máy đo độ cồn: Sử dụng thiết bị đo độ cồn Salleron Dujardin Paris.
Nguyên tắc: Cồn tinh khiết có nhiệt độ sơi dưới áp suất khí quyển là 76,5oC, nhưng khi tồn tại cùng nước thì nhiệt độ sơi sẽ tăng lên và có giá trị nào đó ứng với tỉ lệ cồn/nước nhất định. Hỗn hợp cồn, nước bốc lên làm cho nhiệt độ tăng lên đỉnh điểm nào đó ứng với nồng độ cồn trong dịch lên men. Lúc này nhiệt kế chỉ nhiệt độ không đổi 2- 3 phút, đọc kết quả rồi tra bảng để xác định được % cồn trong dịch thí nghiệm.
Tiến hành: Dùng 40ml nước cất cho vào máy đo, ghi lại nhiệt độ sôi.
Luận văn Thạc sĩ Sinh học Phạm Thị Hậu
2.2.2.3. Phương pháp phân tích hàm lượng vitamin C
Nguyên tắc: Sử dụng dung dịch Iot để oxi hóa L-ascorbic, điểm kết thúc của phản ứng nhận biết nhờ chỉ thị dung dịch tinh bột. Đây là phương pháp xác định nhanh và cho kết quả đúng.
Tiến hành: Cho 10ml dịch mẫu vào bình 250ml, cho thêm 5ml dung dịch HCl 5% thêm vài giọt tinh bột, lắc nhẹ rồi chuẩn độ bằng dung dịch Iot 0,01N tới khi xuất hiện màu xanh tím thì dừng.
Lượng vitamin C tính theo cơng thức:
Trong đó: C: Hàm lượng vitamin C (mg/l).
n: Số ml dung dịch Iot 0,01 N dùng để chuẩn độ. v: Số ml dung dịch mẫu đem phân tích.
0,88: Số mg axit ascorbic tương ứng với 1ml dung dịch Iot 0,01N.