CHƢƠNG II : VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp
2.2.3. Phương pháp vi sinh
Phương pháp xác định tổng số vi sinh vật
Đây là phương pháp đếm tổng số vi sinh vật trực tiếp trên buồng đếm qua kính hiển vi. Đếm 4 ô bốn góc và 1 ơ trung tâm. Lượng vi sinh vật tính theo cơng thức sau:
Trong đó:
T: Tổng số vi sinh vật (cfu/ml).
a: Là tổng số tế bào trong 5 ô vuông lớn của buồng đếm. n: Độ pha loãng.
Luận văn Thạc sĩ Sinh học Phạm Thị Hậu
Phương pháp xác định Coliform và Ecoli
Xác định hàm lượng Coliform và Ecoli cho biết mức độ ơ nhiễm và tình trạng vệ sinh trong phân xưởng sản xuất hay nói chính xác hơn là xác định mức độ ô nhiễm của phân trong sản phẩm.
Môi trường
Mơi trường Violet Red Bile Agar (VRB) có sẵn trong chai,cân 19.75g, hịa tan trong 500 ml nước, hấp khử trùng trong 121oC trong 20 phút, làm nguội tới 450C.
Quy trình phân tích
Mẫu được pha lỗng ở cấp độ 10-1, 10-2, 10-3. lấy 1ml mẫu đã pha loãng cho vào hộp lồng, bổ sung vào đĩa môi trường thạch VRB, chờ thạch đông, lật ngược đĩa, nuôi trong tủ ấm 30oC. Theo dõi và đếm khuẩn lạc trong 48- 72 giờ.
Kết quả
Đếm số lượng khuẩn lạc và tính theo cơng thức như với vi sinh vật tổng số.
Phương pháp xác định số lượng nấm men – nấm mốc
Có trong sản phẩm để đánh giá chất lượng tình trạng vệ sinh và các điều kiện bảo quản sản phẩm và dự đoán khả năng hư hỏng của sản phẩm.
Nguyên tắc
Cấy trên bề mặt thạch của môi trường Yeast Glucose Chloramphenicol 100 , đã được pha loãng ở các nồng độ 10-1, 10-2, 10-3 . Mỗi nồng độ cấy lên 2 đĩa thạch. Ni ở 300C trong điều kiện hiếu khí, từ 48-72 giờ. Đếm số khuẩn lạc mọc trên đĩa, từ đó xác định lượng nấm men, nấm mốc trong mẫu phân tích.
Thành phần mơi trường:
Mơi trường YGC
- Glucose : 12g
- Cao nấm men : 3g
- Thạch : 9g
Luận văn Thạc sĩ Sinh học Phạm Thị Hậu
- Bổ sung nước đủ 600 ml
Hấp vô trùng ở 1210C trong 20 phút.
Tiến hành
Mơi trường và dung dịch pha lỗng đem hấp khử trùng ở 1210C trong 20 phút. Pha loãng mẫu thập phân tới nồng độ 10-1,10-2, 10-3
Sau khi đổ thạch vào hộp lồng, đợi thạch đơng lại, lấy 1μl mẫu đã pha lỗng cho vào hộp lồng, dùng que trang để trang đều lên bề mặt thạch, lật sấp hộp lồng xuống, đặt vào tủ ấm khoảng 300C trong 48-72 giờ.
Kết quả
Đếm số lượng khuẩn lạc và tính theo cơng thức như với vi sinh vật tổng số.