2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.3.5. Nghiên cứu các đặc điểm hóa sinh của các chủng vi sinh vật
Để kiểm tra khả năng đồng hóa các hợp chất hữu cơ điển hình của các chủng vi khuẩn, chúng tôi tiến hành thử với Kit thử API 20NE cho vi khuẩn Gram (-) của hãng BioMérieus. Hóa chất và thuốc thử đƣợc cung cấp cùng với bộ kit tƣơng ứng.
Các bước tiến hành:
- Chuẩn bị mẫu vi khuẩn mới, không quá 24 giờ.
- Sau khi nuôi cấy tiến hành bổ sung vi khuẩn vào nƣớc cất khử trùng sao cho OD 600nm đạt giá trị 0,132.
- Bổ sung 0,2ml dịch vi khuẩn đã pha loãng vào các giếng từ NO3 (potassium nitrae) đến PNPG (4-nitrophenyl- D-galactopyranoside) bổ sung thêm dầu khống vào các ống kí hiệu GLU (D-glucose), ADH (L-arginine), URE (urea).
- Thêm 0,2ml dịch vào các ống API AUX, trộn nhẹ cho đều, rồi bổ sung 0,2ml dịch này vào các ống còn lại từ GLU (D-glucose) đến PAC (phenylacetic axít).
- Đóng hộp, ủ trong 24 giờ.
- Sau 24 giờ kiểm tra NO3- bằng thuốc thử NIT 1 và NIT 2, nếu phản ứng dƣơng tính, sau 5 phút dịch trong ống sẽ chuyển thành màu hồng đỏ, nếu âm tính sẽ khơng có màu. Nếu phản ứng âm tính thì cần kiểm tra việc sản xuất nitơ bằng cách bổ sung thêm 2-3mg Zn2+. Sau 5 phút nếu dịch trong ống không màu thì là phản ứng dƣơng tính, nếu chuyển sang màu hồng là âm tính.
- Kiểm tra TRP (L-tryptophane) bằng cách thêm 1 giọt thuốc thử JAMES, phản ứng dƣơng tính sẽ cho màu hồng ngay tức khắc; ESC (esculin ferric citrate) kết quả dƣơng tính cho màu đen, âm tính cho màu vàng; GEL (gelatin) dƣơng tính cho màu đen bị khuếch tán.
- Kiểm tra khả năng đồng hóa các hợp chất còn lại bằng cách dựa vào độ đục, phản ứng dƣơng tính cho độ đục cao.
- Phân tích kết quả với phần mềm của hãng BioMérieus.