Tên cặp mồi Màu huỳnh quang Nồng độ (µM)
X1 Xanh dương (FAM) 0.25 X2 Xanh lục (HEX) 0.2 X3 Đen (NED) 0.4 X4 Xanh lục (HEX) 0.2 X5 Xanh lục (HEX) 0.2 X6 Xanh dương (FAM) 0.2 X8 Xanh dương (FAM) 0.7 X9 Đen (NED) 0.2 X10 Đen (NED) 0.6 X11 Xanh dương (FAM) 0.4 X12 Xanh lục (HEX) 0.25 X13 Đen (NED) 0.3 X14 Xanh dương (FAM) 0.3 X15 Đen (NED) 0.15
Hình 20. Kết quả điện di mao quản phản ứng PCR đa mồi cho 14 cặp mồi có nồng độ phản ứng đã hiệu chỉnh
Kết quả điện di cho thấy cường độ tín hiệu sản phẩm của 14 cặp mồi đã được cải thiện rõ rệt, hầu hết các chỉ thị đều có 2 tín hiệu sản phẩm có kích thước khác nhau tương ứng với 2 allele dị hợp tử với cường độ sản phẩm tương đương nhau. Chu trình nhiệt phản ứng PCR đa mồi có: bước khởi đầu phản ứng ở 95oC trong 15 phút; 30 chu kỳ nhiệt: biến tính ở 94oC trong 30 giây, gắn mồi ở 60oC trong 90 giây, kéo dài mạch ở 72oC trong 60 giây. Bước tổng hợp sản phẩm cuối cùng của các cặp mồi ở 60oC trong 30 phút.
3.1.3. Chỉ số đa hình và chỉ số dị hợp tử của các STR
Sau bước tổng hợp và tính tốn các chỉ số đa hình thu được từ các mẫu mang và khơng mang gen bệnh cũng như trên quần thể tổng số 153 mẫu (thống kê ở Phụ lục), chúng tơi nhận thấy tồn bộ 13 chỉ thị STR được lựa chọn đề có chỉ số dị hợp tử quan sát và chỉ số đa hình PIC cao trên 0.5, đặc biệt các chỉ thị DXS1073, REN90682,
stSG604486 có chỉ số này là 1 ở quần thể 50 mẫu đối chứng (không mang gen bệnh). Như vậy, các chỉ thị này đáp ứng được tiêu chuẩn về tính đa hình. Nghiên cứu của chúng tôi cũng là nghiên cứu đầu tiên báo cáo đầy đủ về các chỉ số đa hình của các STR liên kết gen F8 được sử dụng trên quần thể người Việt Nam.