STT Thể tích dung dịch
chuẩn ED-065 Thể tích dung mơi axetonitril (µl)
Nồng độ dung dịch 1 100 µl dd A 900 25 µg/µl 2 100 µl dd (1) 900 2,5 µg/µl 3 100 µl dd (2) 900 250 ng/µl 4 500 µl dd (3) 500 125 ng/µl 5 400 µl dd (4) 600 50 ng/µl 6 400 µl dd (5) 600 20 ng/µl 7 500 µl dd (6) 500 10 ng/µl 8 500 µl dd (7) 500 5 ng/µl 9 200 µl dd (8) 800 1 ng/µl 10 500 µl dd (9) 500 0,5 ng/µl 11 200 µl dd (10) 800 0,1 ng/µl
2.2.4. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao
2.2.4.1. Pha dung môi pha động
Thành phần chính xác của pha động được dùng phụ thuộc vào cấu trúc của isoxyanat đang cần xác định. Càng nhiều axetonitril trong pha động, các pic sẽ rửa giải càng nhanh và ngược lại. Pha động “chậm” có thể được sử dụng cho diisoxyanat dạng monome và các dẫn xuất MP của monoisoxyanat. Các dẫn xuất MP dạng polime, được sử dụng cho pha động “nhanh” có tính bền hơn [18].
Trong nghiên cứu này phân tích xác định các diisoxyanat dạng monome và monoisoxyanat nên pha động được sử dụng là pha động “chậm”. Tiến hành thử nghiệm với pha động có các tỷ lệ thể tích khác nhau của natri axetat (CH3COONa) và axetonitril (ACN).
Pha động chứa CH3COONa : ACN có tỷ lệ 45:55
Cân 2,5 g CH3COONa cho vào bình định mức 1 L, thêm nước cất đã loại ion vào bình định mức đến thể tích 500 mL. Nhỏ từ từ axit axetic băng vào dung dịch CH3COONa và liên tục lắc đều để đạt được pH = 6.
Lấy 450 mL dung dịch CH3COONa đã chuẩn pH ở trên cho vào bình định mức 1L. Sau đó cho 550 mL Axetonitril vào bình định mức, lắc đều cho đến khi hỗn hợp dung dịch được hịa trộn hồn tồn. Cho hỗn hợp vào bình 1 L đựng pha động của HPLC.
Hỗn hợp dung dịch pha động HPLC được loại khí trong vịng 30 phút để đảm bảo pha động phân tích khơng có bọt khí làm kết quả phân tích khơng chính xác. Chú ý khi loại khí của pha động HPLC cần đậy một cốc sạch lên miệng bình để khơng cho chất bẩn xâm nhập vào pha động.
Lắp bình đựng pha động vào hệ thống HPLC để phân tích mẫu.
Pha động chứa CH3COONa : ACN có tỷ lệ 55:45
Cân 5 g CH3COONa cho vào bình định mức 1 L, cho nước cất đã loại ion vào bình định mức lên 1000 mL. Nhỏ từ từ axit axetic băng vào dung dịch CH3COONa và liên tục lắc đều để đạt được pH = 6.
Lấy 550 mL dung dịch CH3COONa đã chuẩn pH ở trên cho vào bình định mức 1L. Sau đó cho 450 mL Axetonitril vào bình định mức, lắc đều để tạo hỗn hợp dung dịch hòa trộn đồng đều. Cho hỗn hợp vào bình 1L đựng pha động của HPLC. Hỗn hợp dung dịch pha động HPLC được loại khí trong vịng 30 phút.
Lắp bình chứa pha động vào hệ thống HPLC để phân tích mẫu.
Pha động chứa CH3COONa : ACN có tỷ lệ 65:35
Cân 3,5 g CH3COONa cho vào bình định mức 1 L, thêm nước cất đã loại ion vào bình định mức đến thể tích 700 mL. Nhỏ từ từ axit axetic băng vào dung dịch CH3COONa và liên tục lắc đều để đạt được pH = 6.
Lấy 650 mL dung dịch CH3COONa đã chuẩn pH ở trên cho vào bình định mức 1 L. Sau đó cho 350 mL Axetonitril vào bình định mức rồi lắc đều cho hỗn hợp dung dịch được hịa trộn hồn tồn. Cho hỗn hợp vào bình 1 L đựng pha động của HPLC. Hỗn hợp dung dịch pha động HPLC được loại khi trong vòng 30 phút.
Lắp bình đựng pha động vào hệ thống HPLC để phân tích mẫu.
2.2.4.2. Khảo sát điều kiện phân tích các isoxyanat trên HPLC
Để khảo sát lựa chọn các điều kiện phân tích các isoxyanat tốt nhất trên máy HPLC, trong nghiên cứu này đã khảo sát việc thay đổi tỷ lệ pha động giữa nồng độ CH3COONa và ACN theo các tỷ lệ nêu trong bảng 2.4.