Nhóm chất Anthranoid Steroid triterpenoid Alkaloid Flavonoid Saponin
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng
3.1.2. Kết quả sắc ký ghép khối phổ của cao vỏ lá Lô hội
Sắc ký ghép khối phổ GC/MS của cao Lơ hội được thể hiện ở hình 3 .5. Kết quả xác định thành phần hố học trong cao vỏ lá Lơ hội ở bảng
Hình 3. 5: Sắc ký đồ của cao vỏ lá Lô hội
Nhận xét: Qua kết quả trên sắc ký đồ, nhận thấy có 8 giá trị có thời gian lưu khác
nhau, điều đó có nghĩa trong mẫu cao Lơ hội thu được 8 cấu tử, ứng với 8 hợp chất. Các cấu tử ở những điểm peak: 13.634; 17,162; 30.770; 34.475 có thời gian lưu cách xa nhau và có hàm lượng cao nhất trong cao Lơ hội. Các cấu tử cịn lại có cường độ tương đối thấp nên có hàm lượng khơng đáng kể trong cao Lơ hội. Cũng có một số cấu tử có thời gian lưu rất gần nhau, chúng có thể là đồng phân của nhau như các cấu tử ở các peak: 31.618 và 31.865; 33.042, 33.883 và 33.987.
Bảng 3. 10: Kết quả phân tích thành phần hóa học của cao vỏ lá Lô hội
TT Rt
1
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 49 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Nhận xét: Theo bảng phân tích thành phần hóa học của mẫu cao Lơ hội cho thấy có
tổng cộng 11 cấu tử được định danh, nhưng sắc ký đồ chỉ thể hiện 7 điểm peak có tên trên biểu đồ. Có thể nguyên nhân là do điểm peak của các cấu tử cịn lại có cường độ q thấp nên khơng thể hiện tên của các cấu tử lên biểu đồ. Kết quả bảng
phân tích cho thấy thành phần cao Lơ hội tại Xã Long Phước gồm 11 cấu tử và thành phần chính chủ yếu là: (3E,5E)-4,5-Dibutyl-2,2,7,7-tetramethyl-3,5-octadiene chiếm 6.036%; Phytol chiếm 13.10%; Heptacosane chiếm 32.146%; -Sitosterol chiếm 23.83%. Kết quả chạy sắc ký phổ cho thấy diện tích peak của Heptacosane là thành phần chủ yếu.
3.2. Kết quả khảo sát khả năng kháng khuẩn bằng phương pháp đo vòng kháng khuẩn
Khả năng kháng khuẩn của cao Lơ hội
Bảng 3. 11: Đường kính vịng kháng khuẩn của cao vỏ lá Lơ hội (mm)
STT 1 2 3 4 5 6 7
Trên chủng E.coli khi khảo sát các nồng độ trên cho thấy ba nồng độ 1600 mg/ml, 800 mg/ml và 400 mg/ml khơng có sự khác nhau, kết quả của 3 nồng độ là 3
mm.Nồng độ còn lại là 200 mg/ml không thấy hiện tượng kháng lại vi khuẩn E.coli. Kết quả cho thấy hoạt tính kháng khuẩn của cao Lơ hội đối với chủng E.coli tương đối ổn định, nhận thấy cao vỏ lá Lơ hộ có khả năng kháng chủng này.
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 51 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
Hình 3. 6: Khả năng kháng E.coli của cao Lô Hội
1: 1600 mg/ml 2: 800 mg/ml 3: 400 mg/ml 4: 200 mg/ml
Trên chủng vi khuẩn B. cereus khi khảo sát ở các nồng độ nhận thấy ở hai nồng độ 1600 mg/ml và 800 mg/ml có sự chênh lệch đáng kể, kết quả lần lượt là 4.5
mmvà 3 mm. Các nồng độ còn lại là 400 mg/ml và 200 mg/ml kết quả thu được ở 2 nồng độ trên lần lượt là: 2mm và 0 mm. Kết quả cho thấy hoạt tính kháng khuẩn của cao Lô hội đối với chủng B. cereus tương đối cao, nhận thấy dịch chiết từ lá Lơ hội có khả năng kháng chủng này tốt.
Hình 3. 7: Khả năng kháng B. cereus của cao Lô Hội
1: 1600 mg/ml 2: 800 mg/ml 3: 400 mg/ml 4: 200 mg/ml HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng download by : skknchat@gmail.com
Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu
Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học
Trên chủng S. typhi khi khảo sát các nồng độ trên, nhận thấy rằng hai nồng độ đầu là 1600 mg/ml và 800 mg/ml có kết quả ghi nhận lần lượt là 3 mm và 3 mm khơng có sự khác nhau. Mặt khác, ở hai nồng độ tiếp theo là 400 mg/ml và 200 mg/ml khơng có hiện tượng kháng lại vi khuẩn.
Hình 3. 8: Khả năng kháng S. typhi của cao Lô Hội
Trên chủng P. aeruginosa khi tiến hành khảo sát với 4 nồng độ trên, nhận thấy ở tất cả các nồng độ khơng có khả năng kháng lại vi khuẩn chủng này. Dựa theo kết quả nhận thấy với chủng P. aeruginosa, cao Lô hội ở nồng độ cao (1600 mg/ml) khơng có khả năng kháng kể cả ở nồng độ thấp.
Hình 3. 9: Khả năng kháng P. aeruginosa của cao Lô hội
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 53 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
Cuối cùng là chủng S. aureus, tương tự như chủng P. aeruginosa, nhận thấy các nồng độ khảo sát khơng có khả năng kháng khuẩn từ nồng độ cao nhất đến nồng độ thấp nhất.
Hình 3. 10: Khả năng kháng S. aureus của cao Lô Hội
Nhận xét:
DMSO 5% là mẫu chứng âm không thể kháng khuẩn.
Thuốc kháng sinh Tetracyline có hoạt tính kháng 5 chủng khuẩn cao hơn và tốt hơn so với dịch chiết cao Lơ hội. Dịch chiết cao vỏ lá Lơ hội có hoạt tính kháng đối với 3 chủng khuẩn (E.coli, B.cereus và S.typhi).
Với nồng độ 1600 mg/ml và 800 mg/ml em nhận thấy rằng vịng kháng sinh to, rõ ràng và có sự chênh lệch ít. Các nồng độ cịn lại 400 mg/ml, 200 mg/ml có sự chênh lệch và khác nhau rõ rệt, ở nồng độ 400 mg/ml vẫn có vịng kháng nhưng ở nồng độ 200 mg/ml khơng có có vịng kháng. Vì khi nồng độ cao vỏ lá Lơ hội càng thấp thì hoạt tính kháng càng giảm.
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 54 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu
Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học
Hình 3. 11: Biểu đồ thể hiện khả năng kháng khuẩn của cao vỏ lá Lô hội đối với 5 chủng vi khuẩn
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 55 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1. Kết luận
Qua quy trình thực nghiệm chiết tách cao vỏ lá Lơ Hội, điều kiện để thu được hiệu suất cao chiết cao nhất là:
Dung môi sử dụng là:
Tỷ lệ dung môi : nguyên liệu là : Nhiệt độ trích ly là
Thời gian trích ly là
Định tính một số chất hữu cơ trong cao Lơ hội qua 6 dung môi khác:
Kết luận: Hầu hết tất cả bột lá Lô hội được chiết với 5 dung mơi khác nhau đều
phản ứng dương tính với Anthranoid, Steroid – triterpenoid. Nhưng do Ethanol có một đầu phân cực có thể hịa tan được nhiều ion như K, Mg, Cu, Fe... và một đầu khơng phân cực để hịa tan các hoạt chất như Anthranoid, Steroid – triterpenoid...
Khảo sát khả năng kháng vi sinh vật của cao vỏ lá Lô hội:
Kết luận:
Kết quả khảo sát về khả năng của cao vỏ láLô hội đối với các chủng vi khuẩn được thử nghiệm cho thấy ở nồng độ cao 1600 mg/ml và 800 mg/ml đạt đường kính vịng kháng khuẩn cao nhất ở 3 loại chủng khuẩn. Ở hai nồng độ 200 mg/ml thì cao Lơ hội vẫn cịn hoạt tính kháng và 100 mg/ml thì cao vỏ lá Lơ hội khơng cịn khả năng kháng các chủng vi khuẩn.
Ngoài ra, ở nồng độ 1600 mg/ml nhận thấy cao vỏ lá Lơ hội có khả năng kháng tốt hơn kháng sinh Chloramphenicol.
4.2. Kiến nghị
Quá trình nghiên cứu này được thực hiện trong quy mơ phịng thí nghiệm và với thời gian hạn chế. Do đó, em xin đưa ra một số kiến nghị như sau:
- Nghiên cứu thêm các phương pháp chiết cao vỏ lá Lô hội sử dụng các loại enzyme, dùng sóng siêu âm hay vi sóng,... với các tỉ lệ ngun liệu/dung mơi khác nhau để quá trình chiết đạt hiệu quả cao hơn.
- Định danh một số hợp chất khác trong Lô hội để đánh giá khả năng dược liệu của cây.
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 56 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu
Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học
- Nghiên cứu điều chế nano bạc từ chiết xuất Lô hội phục vụ trong lĩnh vực mỹ phẩm.
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 57 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu Tiếng Việt
[1].Bộ Y Tế và Bộ Giáo Dục Đào Tạo, 1998, Bài giảng dược liệu tập 1. Nhà xuất bản Hà Nội.
[2]. Cao Minh Trí; Bùi Văn Hậu; Lê Tiến Dũng. Khảo sát thành phần hóa học của
lá cây lô hội (Aloe vera L. var. chinensis (Haw.) Berger). Số 9, tháng 6/2013.
[3].Đỗ Tất Lợi. 1990. Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật. 458 - 460.
[4]. Đỗ Thị Việt Hương, Nguyễn Thị Huệ. Xác định và ứng dụng thành phần hóa
học của gel lơ hội. Tạp chí phân tích Hóa, Lý và Sinh học - Tập 19, Số 3/2014.
[5]. Phạm Hoàng Hộ. 1999. Cây cỏ Việt Nam. Vol. III, 738. Nhà xuất bản trẻ.
[6]. Tiến sĩ Chompoosor.“Tổng hợp nano bạc từ chiết xuất Nha đam”. Số 11 năm 2017. Tạp chí khoa học cơng nghệ Việ Nam.
[7].Viện Dược liệu. 2006. Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam. Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật. Hà Nội. 171-173.
[8]. Cây thuốc - Lô Hội. Dược điển Việt Nam IV, chuyên luận dược liệu. Năm
2017 Tài liệu Tiếng Anh
[9]. B. Vogler and E. Ernst. "Aloe vera: a systematic review of its clinical
effectiveness". Br J Gen Pract. Vol. 49, pp. 823-828, 1999.
[10].C. A. Newall, L. A. Anderson, and J. D. Phillipson, Herbal medicines. A guide
for healthcare professionals: The pharmaceutical press. 1996.
[11]. Coopoosamy, R.M. and Magwa, M.L., 2006. Antibacterial activity of Aloe
vera edmodin and Aloin A isolated from Aloe excels. African Journal of
Biotechnology, 5: 1279 – 1282.
[12].C. M. d. C. X. Holanda, M. B. d. Costa, N. C. Z. d. Silva, S. Júnior, V. S. d. A.
Barbosa, R. P. d. Silva, et al. "Effect of an extract of Aloe vera on the biodistribution
of sodium pertechnetate (Na99mTcO4) in rats" Acta Cirurgica Brasileira. Vol. 24, pp. 383-386, 2009.
[13]. Chandan, A.B.K., Saxena, Z.A.K., Sukla, S., Sharma, N., Gupta, D.K., Suri,
K.A., Suri, J., Bahauria, M., and Singh, B., 2007. Hepatoprotective potential of Aloe
barbedensis Mill. Against carbon tetrachloride induced hepatotoxicity. J
Ethnopharmacol, 11: 560 – 569.
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 58 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu
Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học
[14]. Gabriella Roda; Cristina Marinello; Anita Grassi; Claudia Picozzi; Giancarlo
Aldini; Marina Carini and Luca Regazzoni. Ripe and Raw Pu-Erh Tea. LC-MS
Profiling, Antioxidant Capacity and Enzyme Inhibition Activities of Aqueous and Hydro-Alcoholic Extracts. 2019, 24, 473.
[15]. Grindlay D.; ReynoldsT.J.Ethnopharmcol.The Aloe vera phenomenon: A
review of the properties and modern uses of the leaf parenchyma gel. Vol 16, 117 -
151 (1986).
[16]. Kulveer Singh Ahlawat; Bhupender Singh Khatkar. Processing, food
applications and safety of aloe vera products: a review. 525–533 (2011).
[17]. Josias H.H. 2008. Composition and Application of Aloe vera Leaf Gel.
Molecules, 13, 1599 – 1616.
[18].Lisa, B., Francois, H., Westhuizen, VD, and Loots, D.T., 2008. Phytochemical
Content and Antioxidant Capacties of Two Aloe greatheadii var. Davyana Extracts.
Molecules 13: 2169-2180.
[19]. Duangporn, W., Sitikorn, L., Kessarin, T., Kanjana, S., Naruemon, K.,
Rungsun, R. And Prasong, S., 2014. Aloe vera attenuated liver injury in mice with
acetaminophen-induced hepatitis BMC Complementary and Altemative Medicine.
14: 229-239.
[20].Masatoshi, Y., M. Toshio, S. Kiyoshi, Y. Masami, N. Kazuya and N. Hiroyuki,
1991. Anti-inflammatory Active Constituents of Aloe arborescens Miller, 55, 1627- 1629.
[21]. M. Nagaraju1; Suhas Ramulla And N.Y.S. Murthy. Extraction and
Preliminary Analysis of Aloin Obtained from Aloe barbadensis Miller. Vol. 23, No.
6 (2011), 2421-2423.
[22]. Mulabagal, V., Shih-hua, F., Chan, Z. And Hsin Sheng, T., 2006. Modulation
of activated Murine Peritoneal Macrophages. Function by Emodin, Aloe-emodin and Barbaloin Isolated from Aloe barbadensis. Journal of Food and Drug Analysis, 14(1): 7-11.
[23]. Ninad R Jawade; Abhjeet R. Chavan. Ultrasonic-Assisted Extraction of Aloin
from Aloe Vera Gel. 2013, 487– 493.
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 59 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên
[24]. Pecere. T., Gazzola, M.V., Muciganat, C., Vecchia, F.D., Cavaggion, A., Baso, G., Diaspro, A., Salvato, B., Carli, M. And Palu, G., 2000. Aloe emodin is a
new type of anticanger agent with selective activity against neuroectodermal tours.
Cancer Res. 60: 2800-2804.
[25]. Pilar Preto, Manuel, Miguel Aguilar. Spectrophotometric Quantition of
Antioxidant Capacity through the F ormation of a P hosphomolybdenum Complex: Specific Application to the Determination of Vitamin E1.
[26]. Pankaj K.S, Deen, D.G., Ritu, S., Priyanka, P., Sharmistha, G., Atul, K.S.,
Ajay, K. and Kapil, D.P., 2013. Therapeutic and Medicinal Uses of Aloe vera: A
Review. Pharmacology & Pharmacy. 4: 599-610.
[27]. R. Rajeswari; M. Umadevi; C. Sharmila Rahale; R.Pushpa; S.
Selvavenkadesh;
K. P. Sampath Kumar; Debjit Bhowmik. Aloe vera: The Miracle Plant Its Medicinal
and Traditional Uses in India. Vol. 1 No. 4 2012.
[28]. Rubeena, S., Faizi, S., Deeba, F., Siddiqui, B.S. and Qazi, M.H., 1997.
Athrone from Aloe barbadersis. Phytochemistry. 45(6): 1279 – 1282.
[29]. R. J. E. Grindlay D."The Aloe vera phenomenon: A review of the properties
and modern uses of the leaf parenchyma gel". Vol. 16, pp. 117-151, 1986.
[30].Singh, S., Sharma, P.K., Kumar, N. And Dudhe, R., 2010. Biological activities
of Aloe vera. International Journal Of Pharmacy & Technology, 2(3): 259 – 280.
[31]. S. Joshi. "Chemical constituents and biological activity of Aloe barbadensis-A
review.J. Med. Aromat.Plant. Sci. 20". Pp. 768-773, 1998.
[32]. S. Jayakumari; Prabhu K; Mudiganti Ram Krishna Rao; Bhupes; D.Kumaran;
Aishwariya Ramesh. The GC MS Analysis of a Rare Medicinal Plant Aloe
barbadensis. Vol. 9(7), 2017, 1035-1037.
[33]. Tian, B,. Hua, Y.J., Ma, X.Q. and Wang, G.L., 2003. Relationship between
antibacterial activity of Aloe and is anthraquinone compounds. Department of
Applied Bioscience, Insitute of Nuclear – Agricultural Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310029, Zhejiang, China.
[34]. Tom Reynolds. Aloe: the Genus Aloe.
[35]. Yun, Nasi, N., Lee, Chan – Ho, C.H., Lee and Sun – Meec, S.M., 2009. Aloe
vera could be a potential therapeutic agent for the clinial treatment of sepsis. Food
Chem Toxicol. 47: 1341: 1350.
Tài liệu website
[36]. Lê Thị Bích Uyển. Nghiên cứu khả năng chống oxy hóa và kháng vi sinh vật
gây bệnh của cao chiết lá lơ hội. Năm 2007 trích từ URL: https://vi.scribd.com.
[37]. Nguyễn Thành Tài. Nghiên cứu khả năng chống oxy hóa và kháng vi sinh vật
gây bệnh của cao chiết lá lơ hội. Năm 2014, trích từ URL: https://app.box.com.
[38]. PGS.TS. Nguyễn Ngọc Hạnh và ThS. Phan Nhật Minh. Nghiên cứu quy trình
chiết tách aloin từ lơ hội. Năm 2007, Viện cơng nghệ hóa học tại TP.HCM (Viện
KH&CN Việt Nam) trích từ URL: http://www.khoahocphothong.com.vn.
[39]. Nguyễn Thanh Tú. Báo cáo dược liệu sắc ký lớp mỏng, trích từ URL: https://www.slideshare.net.
[40]. Phướng pháp quang phổ hấp thụ phân tích UV – VIS, trích từ URL:
https://www.sbc-vietnam.com.
[41]. Nguyên lý hoạt động sắc ký khí ghép khối phổ (GCMS – Gas Chromatography Mass Spectrometry), trích từ URL: http://vinaquips.com.
[42]. Đại cương về các phương pháp quang phổ, trích từ URL:
https://www.slideshare.net.
[43]. Các phương pháp chiết xuất hợp chất thiên nhiên, trích từ URL:
https://text.xemtailieu.com.
[44]. Trường Đại học Nơng lâm Thái Nguyên. Giới thiệu một số phương pháp đánh
giá hoạt tính sinh học các hợp chất thiên nhiên, trích từ URL: http://tuaf.edu.vn.
HDKH: ThS. Vũ Thị Hồng Phượng Trang 61 Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên