Chương 1 TỔNG QUAN VỀ NHỮNG VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU
2.3. THU MẪU VÀ THU THẬP SỐ LIỆU
2.3.4. Tách chiết DNA, nhân dòng và đọc trình tự gene
Mẫu để tách chiết DNA lấy từ mô cơ ngực của vật mẫu. Mô sau khi cắt ra
được bảo quản trong cồn 95%. Tổng số 21 mẫu đã được tách chiết và phân tích DNA
(phụ lục 2).
DNA tổng số được tách chiết theo phương pháp của Sambrook [Sambrook và Russell, 2001]. Sản phẩm DNA sau khi tách chiết được điện di trên gel agarose và nhuộm với FloroSafe, quan sát dưới đèn tia cực tím để kiểm tra.
Việc tách chiết DNA, nhân dòng gene bằng phản ứng PCR được thực hiện tại phịng thí nghiệm Di truyền học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên,
Đại học Quốc gia Hà Nội.
Gene ty thể Cytochrome c Oxidase subunit I (COI) được sử dụng trong phân tích di truyền phân tử của các loài thuộc họ Dơi lá mũi ở Việt Nam. Đây là gene được sử dụng rộng rãi trong định loại bằng di truyền phân tử do có tốc độ tiến hóa nhanh và thích hợp với việc dùng để phân biệt giữa các taxon có quan hệ gần gũi [Hebert và cộng sự, 2003]. Ngồi ra, các trình tự của gene COI của các taxon liên quan có sẵn
trong cơ sở dữ liệu của GenBank, dễ dàng truy cập sử dụng và khai thác cho phân
tích, nghiên cứu.
Gene COI được nhân dịng với mồi chung đã được cơng bố (Universal primers VF1d: 5’–TTCTCAACCAACAARGAYATYGG-3’ và VR1d :5’– TAGACTTCTGGGTGGCCRAARAAYCA-3’ [Ivanova và cộng sự, 2006; deWaard và cộng sự, 2006]. Đoạn gene được nhân dài khoảng 700 bp.
Các sản phẩm PCR được tinh sạch bằng MEGAquick-spinTMTotal Fragment DNA Purification Kit (iNtRON). Sản phẩm sau khi tinh sạch được gửi cho công ty 1st Base Company (Singapore) để đọc trình tự. Việc đọc trình tự được thực hiện bằng