Đối tượng, vật liệu, hóa chất nghiên cứu

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu thiết lập quy trình định lượng HBV RNA huyết tương ở bệnh nhân viêm gan b mạn tính (Trang 37 - 39)

2.1.1. Đối tượng nghiên cứu

Bệnh nhân viêm gan B mạn tính (CHB). Cỡ mẫu (n = 77) được xác định theo phương pháp nghiên cứu lâm sàng, nhóm bệnh nhân này được sử dụng để đánh giá quy trình RT-qPCR định lượng HBV pgRNA sau quá trình tối ưu và đánh giá nhằm đánh giá quy trình trên mẫu bệnh nhân CHB. Đồng thời, so sánh với các quy trình định lượng HBV pgRNA trên thế giới hiện nay. Nhóm chứng: 50 người khoẻ mạnh để xây dựng panel độ đặc hiệu. Ngoài ra, sử dụng 5 mẫu bệnh nhân viêm gan C. Quá trình tối ưu quy trình RT-qPCR sử dụng các mẫu chuẩn dương sẽ thiết kế ở phần sau đây.

Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân nghiên cứu: Chẩn đoán nhiễm HBV mạn tính: Bệnh nhân viêm gan vi rút B mạn tính được xác định theo tiêu chuẩn của Hiệp hội gan mật Mỹ - 2018 [104]:

 HBsAg (+) > 6 tháng hoặc HBsAg (+) và Anti-HBc IgG (+).

 HBV DNA ≥ 105 copy/mL ở nhóm HBeAg (+) và ≥104 copy/mL ở nhóm HBeAg (-).

 ALT tăng liên tục hay từng đợt.

Tiêu chuẩn chọn nhóm chứng:

Nhóm chứng là những người khỏe mạnh bình thường, khơng có bệnh lý về gan. Các đối tượng nghiên cứu thuộc nhóm chứng đều được khám và xét nghiệm chức năng gan và các dấu ấn của virus viêm gan trước khi thu thập mẫu máu.

Tiêu chuẩn loại trừ:

Loại trừ những bệnh nhân ra khỏi nhóm bệnh nhân nghiên cứu khi có các tình trạng sau:

+ Bệnh nhân có tổn thương gan do nguyên nhân khác: rượu, do thuốc, do hóa chất, do bệnh gan tự miễn...

+ Bệnh nhân đang trong giai đoạn thai kỳ và đang cho con bú.

+ Bệnh nhân mắc các bệnh kết hợp như đái tháo đường, viêm đường mật...

+ Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu.

2.1.2. Vật liệu, hóa chất

Bảng 1: Máy móc, trang thiết bị

STT Thiết bị Hãng sản xuất

1 Máy đo nồng độ DNA Mỹ

2 Máy vortex Hàn Quốc

3 Máy ly tâm Hàn Quốc

4 Tủ an toàn sinh học cấp độ Hàn Quốc

5 Pipetman Đức, Mỹ

6 Khối ổn nhiệt có lắc Mỹ

7 Máy lắc Mỹ

8 Tủ lạnh (4oC, - 80oC) Hàn Quốc

9 Máy Realtime PCR Đức

Bảng 2: Hóa chất nghiên cứu

TT Tên hóa chất Hãng sản xuất

1. Hóa chất dùng trong tách chiết RNA tổng

số

2. Hóa chất dùng trong phản ứng RT-qPCR

1 Quantitect probe master mix QIAGEN

2 Enzyme RTase QIAGEN

3 Primers IDT

4 Taqman probe IDT

4 Nước khử deion DNA/RNAse Free Thermo Scientific

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu thiết lập quy trình định lượng HBV RNA huyết tương ở bệnh nhân viêm gan b mạn tính (Trang 37 - 39)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(93 trang)