3.3. Đánh giá chất lượng quy trình RT-qPCR
3.3.2. Xác định tính ổn định của bộ mẫu chuẩn trên quy trình RT-PCR đo tả
tải lượng HBV pgRNA trong huyết tương bệnh nhân CHB.
Kết quả đánh giá bộ mẫu chuẩn trên quy trình định lượng RT-qPCR dựa trên bộ mẫu chuẩn sau 2 tuần, 1 tháng, 2 tháng và 3 tháng được trình bày theo kết quả hình ảnh RT-qPCR.
108, 107, 106, 105, 104, 103, 102, 101, 100 (copy/pư): dãy nồng độ mẫu chuẩn, NTC: chứng âm.
Hình 25: Kết quả đánh giá bộ mẫu chuẩn sau một tháng.
108, 107, 106, 105, 104, 103, 102, 101, 100(copy/pư): dãy nồng độ mẫu chuẩn, NTC: chứng âm.
Hình 26: Kết quả đánh giá bộ mẫu chuẩn sau hai tháng.
Hình 27: Kết quả đánh giá bộ mẫu chuẩn sau ba tháng.
108, 107, 106, 105, 104, 103, 102, 101, 100 (copy/pư): dãy nồng độ mẫu chuẩn, NTC: chứng âm.
Bảng 12: Kết quả đánh giá độ ổn định của quy trình RT-PCR
Hai tuần Một tháng Hai tháng Ba tháng
Mẫu 1 (Ct) 13,58 14,10 14,41 14,22 Mẫu 2 (Ct) 17,11 17,37 18,08 17,82 Mẫu 3 (Ct) 20,24 20,22 21,45 21,47 Mẫu 4 (Ct) 23,69 23,75 24,51 24,41 Mẫu 5 (Ct) 26,75 26,85 28,72 28,68 Mẫu 6 (Ct) 30,46 30,34 32,03 32,10 Mẫu 7 (Ct) 33,57 33,68 35,26 35,33 Mẫu 8 (Ct) 37,81 37,72 38,20 38,37
Từ những kết quả đánh giá quy trình định lượng RT-PCR dựa trên bộ mẫu chuẩn sau hai tuần, một tháng, hai tháng, ba tháng, nhóm nghiên cứu nhận thấy bộ mẫu chuẩn ổn định, vẫn có khả năng khuếch đại các mẫu trong dải tuyến tính từ 108 - 101 copy/pư với sự khác biệt không lớn về giá trị Ct value. Các mẫu nồng độ thấp
vẫn khơng có sự thay đổi nhiều và các mẫu vẫn cho thấy có độ tuyến tính tốt. Các thơng số của lần chạy tốt, bộ mẫu chuẩn ổn định trong các khoảng thời gian đánh giá.
Tiếp tục đánh giá bộ mẫu chuẩn trong thời gian tới nhằm đảm bảo chất lượng của quy trình định lượng, đặc biệt là khi có bất kì sự thay đổi nào trong quy trình định lượng như thay đổi vị trí đặt máy Realtime PCR, cập nhật chương trình hay phần mềm của máy tính phân tích kết quả, hay thay đổi hóa chất sinh phẩm mới, lơ sinh phẩm mới trong quy trình phân tích mẫu.