2.4.1.Phương pháp khử trùng mẫu cấy
Mẫu cấy được khử trùng theo quy trình: Vật liệu ni cấy là củ (thân hành) được thu hái, được làm sạch bề mặt dưới vòi nước chảy mạnh. Sau đó, củ được
rửa sạch bằng xà phịng trong 10 phút và rửa lại dưới vòi nước sạch trong 5 phút. Trong buồng cấy vô trùng, củđược ngâm trong cồn 700 trong 30 giây, tráng lại bằng nước cất vô trùng 1 - 2 lần, mỗi lần trong 1 phút. Tiếp theo ngâm mẫu trong dung dịch HgCl2 0,1% trong thời gian tối ưu, rửa lại 4 – 5 lần bằng nước cất vô trùng, mỗi lần 1 phút. Tiếp tục ngâm mẫu vào dung dịch Johnson 1% trong 3 phút, rửa lại bằng nước cất vô trùng 2 – 3 lần. Sau đó cắt mẫu ở kích thước nhất định và cấy vào mơi trường vào mẫu cơ bản là MS + 30g/l Saccharose + 5,8g/l agar.
2.4.2.Phương pháp nhân nhanh
Các mẫu sạch bệnh, xanh tốt sau giai đoạn khử trùng sẽ được chuyển sang mơi trường có bổ sung BA và Kinetin để xác định ảnh hưởng của auxin (α-NAA, 2,4D) và cytokinin (BA, Kinetin) tới khả năng tái sinh, hệ số nhân và chất lượng chồi nuôi cấy từ vảy củ đôi, đế củ.
Vảy củ đôi sau giai đoạn khử trùng được cấy vào môi trường bổ sung các
chất điều tiết sinh trưởng để tạo chồi. Chồiin vitrođược cấy chuyển vào mơi trường
nhân nhanh có bổ sung các chất điều tiết sinh trưởngnhằm tăng hệ số nhân.
Đế củ sau giai đoạn khử trùng được ni cấy khởi động vào mơi trường có
bổ sung chất điều tiết sinh trưởng (tạo chồi in vitro trực tiếp) hoặc môi trường tạo mô sẹo (gián tiếp tạo chồi in vitro). Mô sẹo tiếp tục được cấy vào môi trường tái sinh chồi có bổ sung nhóm hợp chất điều tiết sinh trưởng. Chồi in vitro (qua giai
đoạn tạo chồi trực tiếp và gián tiếp) được cấy vào môi trường nhân nhanh có bổ sung các chất điều tiết sinh trưởng nồng độ khác nhau nhằm tăng hệ số nhân của mẫu nuôi cấy.
2.4.3.Phương pháp tạo cây hoàn chỉnh
Sau giai đoạn nhân nhanh, các chồi có chiều cao 4 – 5 cm, có trạng thái sinh trưởng và phát triển bình thường được cấy vào môi trường ra rễ để tạo cây hồn chỉnh.Mơi trường ra rễ là mơi trường nền thích hợp có bổ sung các chất thuộc nhóm auxin và than hoạt tính.
2.4.4.Phương pháp ươm cây
Các cây Lan huệ hồn chỉnh trong bình được rửa sạch agar rồi trồng trên các giá thể khác nhau, tưới đẫm ngay sau khi trồng. Sau đó tưới định kỳ 1 lần/tuần.