Chú thích: (1a) Phổ DAD-3D tại 4 bƣớc sóng trên mẫu chuẩn quercetin (pha
động hệ 1); (1b) Sắc ký đồ bƣớc sóng λ=370 nm của mẫu hoa h e (pha động hệ 1). Hoa hòe trong nghiên cứu n y có h m lƣợng rutin đƣợc tiêu chuẩn hóa là 21,1%, với cột phân t ch l pha đảo, rutin (đỉnh chiếm ƣu thế) do phân cực hơn quercetin sẽ có thời gian lƣu ngắn hơn nên sẽ đƣợc rửa giải ra trƣớc.
Trên hình 3.1b, chúng ta có thể thấy đỉnh ngay sau đỉnh chiếm ứu thế có thời gian lƣu khoảng 19 phút, kết hợp với kết quả quét phổ 3Dở hình 3.1a trên mẫu quercetin chuẩn đã từng bƣớc giúp x c định đỉnh nối tiếp ngay sau đỉnh rutin ở hình 3.9b có khả năng ch nh l quercetin, điều này sẽ đƣợc khẳng định chắc chắn khi tiến h nh phƣơng ph p thêm chất chuẩn. Tuy nhiên, kết quả sắc ký cho thấy thời gian lƣu của đỉnh quercetin cao, nên đỉnh bị dỗng. Vì vậy, trong nghiên cứu này cần phải khảo sát hệ pha động nhằm giảm thời gian lƣu của quercetin.
Kết quả xác định hệ pha đ ng thể hiện ở hình 3.2 và hình 3.3. Kết quả cho thấy
khi rửa giải bằng hệ 1, hệ 2, hệ 3 và hệ 4 khả năng t ch đỉnh quan tâm (quercetin) khỏi đỉnh chiếm ƣu thế (rutin, ph a trƣớc) là tốt nhất, thể hiện độ phân giải đều lớn hơn 1,5 và sắc ký đồ phân tách rõ. Còn hệ 5 và hệ 6 có độ phân giải thấp (nhỏ hơn 1,5) nên đỉnh quan tâm kh ng t ch đƣợc khỏi đỉnh chiếm ƣu thế (hình 3.2).
Đồng thời, kết quả thực nghiệm cũng cho thấy ở hệ 4, quercetin có thời gian lƣu nhỏ nhất trong 4 hệ tách tốt (tr= 10,98 phút, độ phân giải 2,45). Nhƣ vậy, hệ 4 (tỉ lệ A/C/D = 15/65/20) sẽ đƣợc lựa chọn cho các nghiên cứu tiếp theo.