Thời gian lây nhiễm
(phút)
Tổng số mẫu
Số mảnh cấy bắt màu xanh
khi nhuộm gus Giá trị trung bình Tỷ lệ % các mảnh bắt màu xanh Lần 1 Lần 2 Lần 3 10 100x3 16 19 20 18,33+4,33 18,33+4,33 20 100x3 42 45 41 42,67+4,33 42,67+4,33 30 100x3 30 31 27 29,33+4,33 29,33+4,33
Qua bảng trên cho thấy thời gian lây nhiễm ở 20 phút có hiệu quả chuyển gen cao hơn so với thời gian lây nhiễm 10 và 30 phút dựa trên số lƣợng các mảnh lá bắt màu xanh lam khi nhuộm với cơ chất X-gluc.
Qua biểu hiện tạm thời của gen gus trên các mô lá, kết quả cho thấy sự khác
biệt là có ý nghĩa (α = 0,05) trong các khoảng thời gian lây nhiễm là 10 phút, 20 phút và 30 phút. Dựa vào kết quả trên chúng tôi chọn thời gian lây nhiễm 20 phút cho các thí nghiệm tiếp theo.
3.1.2. Ảnh hưởng của thời gian đồng nuôi cấy đến khả năng biến nạp
Thời gian đồng ni cấy có ảnh hƣởng đến hiệu quả chuyển gen. Theo Rolando García González & CS (2008) nếu thời gian đồng ni cấy ít hơn 24 giờ tần số biến nạp và tái sinh thấp, có thể do thời gian ngắn tƣơng tác giữa mô thực vật và vi khuẩn không đủ. Theo Wahlroos &CS (2003) thời gian đồng ni cấy cịn phụ thuộc vào từng loại thực vật. Để xác định thời gian đồng ni cấy tối ƣu, trong thí
nghiệm này chúng tôi tiến hành đồng nuôi cấy các mẫu sau khi lây nhiễm với thời gian lần lƣợt 2 ngày, 3 ngày, 4 ngày. Kết thúc thời gian đồng nuôi cấy các mẫu đƣợc nhuộm với X-Gluc ở 370
C trong 8-12 giờ, sau đó đƣợc rửa với cồn 70% (v/v) để xác định biểu hiện của gen gus. Kết quả thể hiện trong bảng sau.