CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1.1.Khảo sát lựa chọn số sóng thích hợp
3.1. Khảo sát các điều kiện đo phổ hấp thụ hồng ngoại tới quá trình xác định đồng
3.1.1.Khảo sát lựa chọn số sóng thích hợp
Công thức cấu tạo của hai hoạt chất digoxin và digitoxin:
Phân tử hai hoạt chất trên đều chứa:
- Liên kết CH2, CH3 trong xycloankan hấp thụ hồng ngoại ở 3100-2990 cm-1. - Liên kết OH hấp thụ hồng ngoại ở 3400-3000 cm-1.
- Liên kết OH hấp thụ hồng ngoại ở 1800-1660 cm-1.
- Dao động hóa trị đặc trưng của nhóm C-O hấp thụ hồng ngoại ở 1300-1000 cm-1. - Dao động hóa trị nhóm C-H hấp thụ hồng ngoại ở 3000 cm-1.
Có thể nhận thấy các liên kết trong phân tử hai hoạt chất digoxin và digitoxin dao động chủ yếu trong vùng 4000-400 cm-1, do vậy chúng tôi tiến hành đo phổ hồng ngoại của hai hoạt chất trên trong vùng số sóng 4000-400 cm-1.
Để phương pháp nghiên cứu có độ chính xác với mẫu rắn cần chọn được vùng số sóng có tín hiệu cao đối với hoạt chất và đồng thời ảnh hưởng của các tá dược trong vùng đó là tối thiểu.
Mẫu đo phổ hồng ngoại truyền qua của các hoạt chất được chuẩn bị bằng cách: trộn 1mg hoạt chất với 99 mg bột KBr nghiền kỹ bằng cối mã não 10 phút, sau đó lấy 15mg cho vào cối ép thành viên mỏng, đặt vào giá đỡ cuvet để đo trên máy hồng ngoại gần trong vùng số sóng 4000-400 cm-1. Kết quả thu được trình bày ở Hình 3.1, 3.2
Hình 3.2 Phổ hồng ngoại truyền qua của digoxin trong vùng 4000-400 cm-1
Từ hình 3.1 và 3.2 có thể thấy, các đỉnh pic trên phổ hồng ngoại truyền qua của digoxin và digitoxin tương đối trùng nhau. Điều này là do hai hoạt chất này cùng thuộc nhóm glycoside tim nên cấu trúc phân tử của của digoxin và digitoxin gần tương tự nhau (chỉ khác nhau một nhóm –OH), do việc phân tích định lượng đồng thời hai hoạt chất này trong dược phẩm nếu chỉ dùng phương pháp phổ hồng ngoại là rất khó khăn.
Dựa vào phổ hồng ngoại truyền qua của hai hoạt chất trên chúng tôi nhận thấy rằng, các hoạt chất này đều có các đỉnh pic cường độ hấp thụ mạnh trong vùng phổ 3600-2800cm-1 và 1700- 1000 cm-1. Do đó có thể tiến hành nghiên cứu trên hai vùng phổ đặc trưng này. Tuy nhiên, do điều kiện trang thiết bị tại bộ mơn Hóa phân tích hiện chỉ có thiết bị đo quang phổ hồng ngoại Agilent Technologies Cary 600 Series FTIR spectrometer, dải số sóng đo 7500-2800 cm-1, nên chúng tôi đã lựa chọn thiết bị này để tiến hành thưc nghiệm. Vùng phổ lựa chọn tiến hành nghiên cứu hai hoạt chất này là vùng từ 3600- 2800 cm-1.
Có thể quan sát rõ hơn phổ hồng ngoại của digoxin và digitoxin trong vùng 3600- 2800 cm-1 như trên hình 3.3 và 3.4.
digitoxin 3450 3400 3350 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 -0.05 -0.10 -0.15 -0.20 -0.25 -0.30 Wavenumber A b s o rb a n c e
Hình 3.3 Phổ hồng ngoại truyền qua của digitoxin trong vùng 3600-2800 cm-1
digoxin 3450 3400 3350 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 -0.1 Wavenumber A b s o rb a n c e
Hình 3.4 Phổ hồng ngoại truyền qua của digoxin trong vùng 3600-2800cm-1
Để khảo sát tính cộng tính tín hiệu đo của digoxin và digitoxin cần tiến hành kiểm tra mức độ xen phủ phổ cũng như phổ tổng cộng của hai chất này trong vùng 3600-2800 cm-1 , phổ tổng cộng được trình bày ở hình 3.5. digitoxin 3450 3400 3350 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 -0.05 -0.10 -0.15 -0.20 -0.25 -0.30 Wavenumber A b s o rb a n c e
Từ hình 3.5 nhận thấy, hồng ngoại truyền qua của hai hoạt chất này là tương đối giống nhau, do có thể kết luận rằng phổ hấp thụ hồng ngoại của digoxin và digitoxin có tính cộng tính. Ngồi ra chúng tơi còn nhận thấy trong vùng số sóng 3600 – 3000 cm-1 phổ của digoxin và digitoxin gần như khơng khác nhau rất khó cho việc phân tích, do vậy để chúng tôi lựa chọn vùng số sóng để phân tích đồng thời hai hoạt chất trên trong khoảng 3000 – 2800 cm-1.
Tiến hành khảo sát ảnh hưởng của các tá dược tới phổ hồng ngoại của các hoạt chất bằng cách đo phổ hồng ngoại truyền qua của các tá dược trong vùng số sóng 4000-400 cm-1 và 3600 – 2800 cm-1.
Mẫu đo phổ hồng ngoại truyền qua của các tá dược được chuẩn bị bằng cách: trộn 1mg tá dược với 99 mg bột KBr nghiền kỹ bằng cối mã não 10 phút, sau đó lấy 15mg cho vào cối ép thành viên mỏng, đặt vào giá đỡ cuvet để đo trên máy hồng ngoại gần trong vùng số sóng 4000-400cm-1. Kết quả thu được trình bày ở Hình 3.6, 3.7, 3.8.
lastose 3450 3400 3350 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 Wavenumber A b s o r b a n c e
Hình 3.6 Phổ hồng ngoại truyền qua của lactose trong vùng 4000-400cm-1 và
Magie stearat 3600 3550 3500 3450 3400 3350 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 Wavenumber A b s o r b a n c e
Hình 3.7 Phổ hồng ngoại truyền qua magie stearat trong vùng 4000-400cm-1 và 3600 – 2800 cm-1 TALC 3600 3550 3500 3450 3400 3350 3300 3250 3200 3150 3100 3050 3000 2950 2900 2850 2800 0.402 0.400 0.398 0.396 0.394 0.392 0.390 0.388 0.386 0.384 0.382 Wavenumber A b s o r b a n c e
Hình 3.8 Phổ hồng ngoại truyền qua talc trong vùng 4000-400cm-1 và 3600 – 2800 cm-1
Từ hình 3.6, 3.7 và 3.8 có thể thấy, trong vùng số sóng khảo sát hai hoạt chất digoxin và digitoxin 3600-2800cm-1, các tá dược cũng có tín hiệu đỉnh pic tương đối mạnh (ảnh hưởng của talc là thấp nhất, sau đó đến lactose và cuối cùng là magiestearat ảnh hưởng lớn nhất). Như vậy, khi phân tích định lượng đồng thời các
trong vùng khảo sát. Do đó khơng thể dùng phương pháp định lượng thông thường dựa trên mối quan hệ giữa độ hấp thụ quang và nồng độ để định lượng các hoạt chất mà phải sử dụng phương pháp phổ hồng ngoại kết hợp với chemometrics để định lượng được từng hoạt chất này.