STT Digoxin Tá dược 1 0,0040 2,9962 2 0,0040 2,9968 3 0,0036 2,9961 4 0,0049 2,9964 5 0,0040 2,9969 6 0,0033 2,9981 7 0,0048 2,9952 8 0,0044 2,9957 9 0,0055 2,9956 10 0,0051 2,9966
Lưu lại kết quả dưới dạng ma trận tín hiệu đo kiểm tra (10x106) và chuyển dữ liệu vào phần mềm Matlb để tính kết quả.
Bước 1: Tìm số cấu tử chính theo PCA trên phần mềm Minitab
Nhập số liệu vào chương trình MINITAB 15, trong đó biến ở các cột là các pic (gồm 106 pic của 30 chất) từ 1 đến 30. Các hàng là mẫu phân tích (gồm 30 mẫu).
Trong cửa sổ chương trình, bật Stat-> Multivariate-> principal components, nhập biến là các cột chứa dữ liệu độ hấp thụ quang của 30 chất, số thành phần chính về lý thuyết có thể chọn là 30. Ma trận được dùng có thể là ma trận tương quan (nếu các biến không cùng thứ nguyên) hoặc ma trận đồng phương sai. Phần đồ thị gồm scree plot và score plot với hai thành phần chínhđược dùng để mơ tả.
Kết quả trị riêng của ma trận hệ số tương quan của các PC thu được ở Bảng dưới đây
Trị riêng 29,607 0,335 0,036 0,016 0,004 0,001 0,000 0,000 0,000 Phương sai đóng góp 0,987 0,011 0,001 0,001 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 Phương sai tính riêng 0,987 0,998 0,999 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 Trị riêng 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Phương sai đóng góp 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 Phương sai tính riêng 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000
Kết quả tính được ở các PC cho thấy sự kết hợp tuyến tính của các biến ban đầu giải thích cho phương sai trong tập số liệu.
Đồ thị screeplot (đồ thị biểu diễn giá trị riêng theo số thành phần) cho thấy PC đầu tiên có giá trị riêng lớn nhất (phương sai tích luỹ chiếm tới 98,7 tổng số phương sai của 106 yếu tố. Nếu tính 3 PC thì giá trị phương sai tích luỹ đạt tới 99,90%, 4 PC thì giá trị phương sai tích luỹ đạt tới 100%, do vậy có thể bỏ qua ảnh hưởng của các PC khác và chọn số PC từ 1-4.
Bước 2 : Nhập ma trận khối lượng (30x3), ma trận kiểm tra (10x3), ma trận tín hiệu đo (30x106), ma trận tín hiệu kiểm tra (10x106) vào phần mềm Matlab tính
tốn theo PCR với số cấu tử chính là 1. Độ lệch chuẩn của phép đo với các PC được chọn là 1-4 được trình bày ở Bảng 3.8
Bảng 3.8 Độ lệch chuẩn của mơ hình hồi quy đa biến tuyến tính xác định riêng digoxin với các PC từ 1-4 Số cấu tử Mẫu 1 2 3 4 1 7,3 1,1 5,9 4,20 2 -14,3 -7,5 19,9 19,26 3 2,1 -19,1 16,9 10,92 4 -12,3 31,1 1,8 0,82 5 11,9 -7,3 -14,9 -18,81 6 -8,8 -15,5 -57,1 -56,18 7 -6,3 17,6 21,6 20,17 8 11,6 2,3 21,2 26,60 9 -3,6 22,1 27,2 41,70 10 11,8 32,0 45,6 22,01
Từ bảng trên chúng tôi nhận thấy với số PC là 1 thì giá trị độ lệch chuẩn thu được là nhỏ nhất, do vậy chúng tôi lựa chọn số cấu tử trong mơ hình hồi quy đa biến xác định riêng digoxin là 1.
3.2.3. Giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng
Tiến hành đo lặp lại 10 lần độ hấp thụ quang 1mẫu nền của mẫu phân tích, ta được ma trận tín hiệu độ hấp thụ quang của đường nền (10x106), nhập dữ liệu vào phần mềm Minitab 15 tính độ lệch chuẩn, ta được ma trận Z (1x106), nhập ma trận Z vào Matlab để tính LOD, LOQ của phương pháp theo cơng thức:
LOD = (3*Z) x Fj LOQ = (10*Z) x Fj Kết quả thu được ở bảng 3.9
Bảng 3.9 Giá trị LOD, LOQ của phương pháp hồi quy cấu tử chính xác định riêng digoxin Tên LOD µg/viên nén LOQ µg/viên nén Digoxin 13,21 21,00 3.2.4. Phân tích mẫu thực tế
3.2.4.1. Xác định hàm lượng digoxin trong mẫu thuốc viên bằng phương pháp
phổ hồng ngoại gần kết hợp với thống kê đa biến
Chúng tôi đã tiến hành lấy hai mẫu thuốc cùng chứa hoạt chất digoxin trên thị trường do hai nhà sản xuất khác nhau để tiến hành nghiên cứu đánh giá hiệu suất thu hồi của phương pháp quang phổ hồng ngoại gần kết hợp với kỹ thuật thống kê đa biến. Kết quả thu được từ phương pháp này được đối chứng với phương pháp phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao. Thơng tin về các mẫu dược phẩm được trình bày ở bảng 3.10
Bảng 3.10 Mẫu dược phẩm chứa hoạt chất digoxin đang lưu thông trên thị trường
STT Ký hiệu Tên Nhà sản xuất Hàm lượng hoạt chất trên bao bì (µg) Hạn sử dụng 1 D1 Digoxin – Richter GedeonRichter – Hungary 250 10/12/2016 2 D2 Digoxine - Nativelle Teofarma - Pháp 250 11/02/2017
Tiến hành cân 20 viên thuốc, tính khối lượng trung bình viên và nghiền thành bột mịn. Cân chính xác 3mg thuốc bột, sau đó tiến hành phân tích như quy trình được trình bày ở 2.3.1, lặp lại 3 lần.
Dựa vào quy trình phân tích tiến hành, chúng tơi đã xây dựng cơng thức tính hàm lượng digoxin trong 1 viên thuốc như sau:
mdigoxin = .
viennen m
m
Trong đó: m là khối lượng digoxin trong 1 viên nén
mdigoxin là khối lượng digoxin trong một viên thuốc (g) mviennen là khối lượng mẫu đem ép viên (3g)
m khối lượng trung bình một viên thuốc.
Trên cơ sở đường chuẩn được xây dựng ở phần 3.4.1 và áp dụng tính tốn theo công thức (3.1), hàm lượng hoạt chất digoxin trong hai mẫu thuốc viên được trình bày ở Bảng 3.11
Bảng 3.11 Khối lượng trung bình của một viên thuốc và khối lượng digoxin trong một viên thuốc
Mẫu Khối lượng trung bình một viên (g) Khối lượng digoxin trong một viên thuốc (g) RSD (%) So sánh với hàm lượng trên bao bì (%) D1 0,1011 0,2387.10-4 5,5 4,25 D2 0,1000 0,2517.10-4 4,5 0,69
Từ các kết quả thu được chúng tôi nhận thấy hàm lượng digoxin trong một viên thuốc xác định bằng mơ hình hồi quy tuyến tính trong D1 là 0,2387 mg (sai khác hàm lượng trên bao bì là 4,25 %), trong D2 là 0,2517mg (sai khác hàm lượng trên bao bì là 0,69%), và hàm lượng digoxin trong mẫu D2 lớn hơn trong D1.
3.2.4.2. Xác định hàm lượng digoxin trong mẫu thuốc viên bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao
Tiến hành cân 20 viên thuốc, tính khối lượng trung bình viên và nghiền thành bột mịn sau đó đem đo trên hệ sắc kí lỏng hiệu năng cao tại Khoa Hóa – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, các kết quả được trình bày ở Hình 3.9, 3.10.
Kết quả tính hàm lượng digoxin trong hai mẫu D1 và D2 so sánh với kết quả tính được với kết quả tính theo mơ hình hồi quy đa biến tuyến tính, kết quả được trình bày ở bảng 3.12.