3.1. KẾT QUẢ
3.1.3. Phân tách các protein trong huyết thanh bằng SDS-PAGE
Các mẫu huyết thanh sau khi tủa đa đƣợc phân tách thành các băng protein có khối lƣợng khác nhau trên gel polyacrylamide có bổ sung SDS. Từ đó mỗi mẫu phân tích đƣợc chia thành các phân đoạn dựa trên khối lƣợng protein. Nhƣ vậy, độ phức tạp của mẫu cũng đƣợc giảm bớt, điều này đặc biệt quan trọng trong việc nâng cao độ chính xác cho bƣớc nhận diện các protein về sau và có thể điều chỉnh tối ƣu các thông số cũng nhƣ bƣớc lên mẫu trong hệ thống phân tích LC-MS/MS. Kết quả điện di đƣợc thể hiện trong Hình 7.
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Hình 7. Hình ảnh điện di các mẫu huyết thanh bệnh nhân ACS sau tủa protein bằng acetone.
M – Marker; Đƣờng chạy 19 – Mẫu huyết thanh bệnh nhân ACS đã loại albumin và IgG
Bản gel điện di này sau đó đƣợc quét bằng máy quét và đƣa hình ảnh thu đƣợc vào máy tính để phân tích. Hình ảnh điện di đƣợc phân tích thơng qua phần mềm
Imagej. Phần mềm này cho phép đo mật độ của các băng protein bằng cách đo mức
độ tƣơng phản giữa các băng protein và phần nền của bản gel trên hình ảnh của gel điện di sau khi nhuộm. Qua các chỉ số mà phần mềm đƣa ra ta có thể ƣớc lƣợng tƣơng đối vị trí cần cắt trên các giếng điện di. Kết quả cho thấy bản gel điện di các mẫu huyết thanh bệnh nhân mạch vành cấp đƣợc cắt thành 8 phân đoạn (Hình 8). Phân đoạn nào chứa ít protein thì đoạn cắt chứa phân đoạn đó sẽ dài và ngƣợc lại đoạn cắt trên phân đoạn giàu protein sẽ ngắn.
Hình 8. Hình ảnh minh họa các phân đoạn huyết thanh bệnh nhân ACS đƣợc cắt trên bản gel SDS – PAGE
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 – Các phân đoạn gel dự định cắt M – Marker
Đƣờng chạy A, B, C, D – Huyết thanh bệnh nhân ACS đã loại albumin, IgG sau tủa