CHƢƠNG II : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.3. Định lượng nhóm chẹn beta bằng LC/MS/MS
Là một kỹ thuật tiên tiến mới được phát triển mạnh mẽ trong những năm gần đây trên thế giới và đã, đang và sẽ được áp dụng trong lĩnh vực phân tích chuyên sâu, đặc biệt cho các phép phân tích địi hỏi độ nhạy và độ chính xác cao.
Cơ chế hoạt động của kỹ thuật này được giải thích cơ bản như sau:
Hệ thống sắc kí LC/MS/MS bao gồm một hệ thống sắc kí lỏng được ghép nối với các detector khối phổ. Trong đó, chức năng của hệ thống sắc kí lỏng giống như các hệ thống sắc kí cổ điển khác là giúp tách các chất cần phân tích riêng biệt. Sau khi các chất cần phân tích được tách từ hệ thống sắc kí lỏng sẽ được chuyển sang hệ thống khối phổ. Mẫu tại hệ thống khối phổ trước sẽ được mù hóa (spray) tạo thành các hạt nhỏ và tiếp theo sẽ chuyển tới hệ khối phổ đầu tiên (hình 2). Tại hệ thống khối phổ thứ nhất (MS1), chất cần phân tích sẽ được cung cấp năng lượng (Fracmentor voltage) bắn phá để tạo ra Precusor ion (Mother ion +1, +2,...). Sau khi được phân mảnh, Precusor ion này của chất cần phân tích sẽ đi vào hệ thống Collision cell. Tại Collision cell, Precusor ion của chất cần phân tích sẽ bị bắn phá
tiếp lần thứ 2 bởi khí trơ (thường là N2, He) để tạo thành các Product ions và các product ions này sẽ được nhận biết bởi hệ thống MS2.
Hình 2 : Hệ thống MSMS (Q1, Q3 : mass spectrometer ; q2: collision cell)
2.2.3. Phƣơng pháp xử lý và đánh giá kết quả
Theo lý thuyết sắc ký, trong một điều kiện sắc ký xác định đã chọn thì thời gian lưu của chất là đại lương đặc trưng để định tính (phát hiện) các chất. Cịn chiều cao và diện tích pic sắc ký có liên quan chặt chẽ đến nồng độ của chất. Trong một khoảng nồng độ xác định và khơng lớn, chúng có mối quan hệ tuyến tính như sau:
Hi = k1.Ci = f(C)
Si = k2.Ci = f(C) Trong đó:
Hi và Si là chiều cao và diện tích của pic sắc ký của cấu tử i. Ci là nồng độ của cấu tử i với thời gian lưu tRi.
k1, k2 là các hằng số thực nghiệm phụ thuộc vào các điều kiện sắc ký. của pha tĩnh cũng như khí mang.
Dựa vào cơng thức trên có thể xác định nồng độ các chất phân tích theo phương pháp đường chuẩn hay thêm chuẩn.
Các số liệu thực nghiệm được xử lý bằng phương pháp toán thống kê với các thông số đặc trưng sau :
+ Giá trị trung bình: 1 1 n i i x x n
+ Độ lệch chuẩn: 2 1 ( ) 1 n i i x x s n
+ Độ lệch chuẩn tương đối: RSD(%) s.100
x