TT Tên chất Thế phân tách mảnh (v) Ion chính (m/z) Năng lƣợng bắn phá (v) Ion chuyển hóa (m/z) 1 Acebutolol 145 337 20 116; 260 2 Alprenolol 115 250 20 116; 273 3 Atenolol 130 267 15 145; 190 4 Betaxolol 135 308 20 161; 231 5 Celiprolol 170 380 20 251; 307 6 Esmolol 130 296 20 145; 219 7 Labetolol 110 329 20 162; 311 8 Levobunolol 110 292 20 201; 236 9 Metoprolol 130 268 15 116; 133 10 Propranolol 130 260 20 116; 183
3.1.2. Nghiên cứu, lựa chọn điều kiện cho phần LC
3.1.2.1. Lựa chọn pha động
Pha động là yếu tố quyết định hiệu suất tách sắc ký của một hỗn hợp chất phân tích. Pha động trong HPLC có thể chỉ là một dung môi hữu cơ đơn như methanol, axetonitril, benzene, n-hexan hoặc nước, hoặc cũng có thể là hỗn hợp của hai hay ba dung môi được trộn với nhau theo những tỉ lệ nhất định phù hợp. Ví dụ như hỗn hợp methanol với nước (MeOH/H2O) trong tỉ lệ 70/30, axetonitril với nước
(MeCN/H2O) trong tỉ lệ 80/20. Nó cũng có thể là dung mơi nước có chưa thêm các chất đệm pH, chất ligan tạo phức, chất làm chậm với nồng độ nhất định thích hợp.
Thành phần pha động ảnh hưởng rất lớn đến hiệu quả tách sắc ký. Pha động có thể ảnh hưởng đến những vấn đề sau đây của sự tách sắc ký các chất
- Độ chọn lọc của hệ pha
- Thời gian lưu giữ của các chất phân tích - Hiệu lực của cột tách
- Độ phân giải của chất trong cột tách - Độ rộng của pic sắc ký của các chất
Khi thay đổi thành phần pha động, chúng ta có thể làm tốt hay làm xấu sự tách sắc ký của một hỗn hợp mẫu trên một hệ pha tĩnh đã chọn. Trong sắc ký lỏng thông thường, pha động thường rất đa dạng và có thể điều chỉnh được bằng các muối (buffer) khác nhau. Do đó, thí nghiệm về ảnh hưởng của của thành phần pha động (chương trình gradient) sẽ được tiến hành nghiên cứu để nhằm đạt được độ phân giải tốt hơn cho các chất nhóm chẹn beta.
Thành phần pha động được nghiên cứu gồm pha động A là nước có pha 1 % axit axetic, và B là acetonitrile. Các pha động được trên được phối hợp với nhau thành các chương trình chạy hỗn hợp pha động theo thời gian (chương trình gradient). Các chương trình gradient được thiết lập trong bảng 11 sau: