TT Chất hấp thụ 50 mg Florisil 50 mgC18 50 mg PSA
Tên Rec. % RSD Rec. % RSD Rec. % RSD
1 Acebutolol 82,5 11,3 61,1 13,1 76,0 8,3 2 Alprenolol 62,4 5,5 60,4 5,7 75,3 6,7 3 Atenolol 89,1 17,1 88,3 4,3 80,6 2,5 4 Betaxolol 81,7 13,6 85,2 10,2 86,2 2,4 5 Celiprolol 85,3 12,8 87,5 8,5 83,1 6,1 6 Esmolol 91,4 15,4 95,0 9,4 78,6 6,5 7 Labetolol 83,2 10,6 85,6 3,8 84,5 9,4 8 Levobunolol 91,0 10,3 81,7 11,1 77,4 8,7 9 Metoprolol 83,4 14,7 76,3 11,4 83,2 11,2 10 Propranolol 80,2 8,8 82,5 7,5 87,2 10,4 Min 62,4 5,5 60,4 3,8 75,3 2,5 Max 91,4 17,1 95,0 13,1 87,2 11,2
Kết quả khảo sát cho thấy, đối với Florisil: độ thu hồi của nhóm chẹn beta dao động từ 62,4 đến 91,0% với độ lệch chuẩn tương đối từ 5,5 đến 17,1%.
Đối với C18: độ thu hồi của nhóm chẹn beta dao động từ 60,4 đến 95,0% với độ lệch chuẩn tương đối từ 3,8 đến 13,1%.
Đối với PSA: độ thu hồi dao động từ 75,3 đến 87,2% với độ lệch chuẩn tương đối từ 2,5 đến 11,2%.
Dựa trên kết quả thu được, chúng tôi chọn chất làm sạch là PSA với hàm lượng 50 mg cho công tác làm sạch mẫu.
PSA là một trong những chất hấp thụ được sử dụng nhiều trong việc làm sạch các chất ảnh hưởng khi phân tích bằng kỹ thuật sắc ký.
Cơng thức hóa học của PSA: SiCH2CH2CH2NHCH2 CH2NH2. Có thể thấy, PSA có 2 điểm có khả năng trao đổi ion (pKa = 10,1 và 10,9) nên có khả năng hấp thụ nhiều loại chất ảnh hưởng có độ phân cực khác nhau cũng như tính chất hóa học khác nhau như đường, chất béo, chlorophyll…Trong thành phần nước tiểu cũng chứa một số các axit hữu cơ như: axit béo và một số loại sắc tố. Vì vậy, chúng tơi chọn PSA là chất hấp thụ cho công tác làm sạch mẫu.
3.3. Xây dựng quy trình phân tích
Từ những kết quả khảo sát điều kiện tối ưu như trên, chúng tôi tiến hành xây dựng quy trình phân tích như sau:
3.3.1. Quy trình chuẩn bị mẫu
10ml mẫu + 10ml Acetonitril cho vào ống Teflon 50ml
Thêm 4 g MgSO4 + 1 g NaCl
Lắc trong vòng 3 trên Máy lắc votex
Hút 1 ml dung dịch vào vial 1,8 ml Ly tâm trong 5 phút, tốc độ 4000 vòng/phút
Lắc trong vòng 1 phút
Hút 2 ml dung dịch phía trên chuyển vào ống 5ml chứa sẵn
150 mg MgSO4, 50 mg PSA
3.3.2. Tổng kết quy trình phân tích trên thiết bị 3.3.2.1. Các điều kiện cho LC 3.3.2.1. Các điều kiện cho LC
Cột sắc ký: Monolithic C18 Analytical Column; Kích cỡ: 2.1× 50 mm; Cỡ hạt: 1.9 μm; Nhiệt độ: 20 - 50 °C.
Pha động: Pha động A: 1% dung dịch acid acetic trong nước cất; Pha động B: Acetonitril.
Chương trình nhiệt độ: Chạy isocratic trong 2 phút với 100 % dung môi B, sau đó chạy gradient từ phút 2,1 đến phút thứ 5 để đạt 85% dung môi B. Giữ nguyên chế độ 85% dung môi B đến 10 phút. Tiếp tục chạy gradient từ phút thứ 10 đến phút thứ 20 để đạt 35% dung môi B và giữ nguyên 35% dung môi B không đổi từ phút thứ 20 đến phút thứ 22.
Tốc độ: 200 μL/min. Thể tích bơm mẫu: 5 µL.
3.3.2.2. Các điều kiện cho MS/MS
a) Thiết lập chế độ cho bộ phận nguồn ESI:
- Thế phun sương (Spray voltage): 1000 v (volts); - Áp suất buồng bơm mẫu (Pressurenebulizer) : 10 psi; - Tốc độ dịng khí N2: 6 L/phút;
- Thế mao quản (Capilary voltage): 4 kV; - Nhiệt độ bay hơi: 350 oC;
- Nhiệt độ của cột mao quản (Ion Transfer Capillary): 330 oC. b) Thiết lập chế độ MRM (Multi Reaction Monitoring)
Chiều rộng Peak liên quan tới độ phân giải phổ khối (FWHM): 0.7 cho cả Q1 và Q3;
Khí va đập (Collision gas): N2;
Áp suất khí va đập (Collision gas): 1.5 mTorr; Chiều rộng quét của MRM: 0.4 Dalton;
Thời gian quét phổ: 30 - 50 ms cho từng bước chuyển hoá và 200 ms cho qt tồn bộ các ion chuyển hố.
Các điều kiện cho chế độ MRM