- Môi trƣờng xác đ nh khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của vi nấm: Nutrient agar 0,1% cơ chất collagen.
3.1. Kết quả phục hồi, lựa chọn các chủng vi nấm nghiên cứu
Trong bộ sƣu tập vi nấm tại Viện 69, có 67 chủng vi nấm thuộc 14 chi 48 lồi có khả năng sinh tổng hợp collagenase đang đƣợc bảo quản bằng hai phƣơng pháp: trong glycerol lạnh và trên silicagen. Với ƣu điểm của phƣơng pháp bảo quản trong glycerol lạnh là có thể bảo quản nhiều chủng loại vi nấm (sinh bào tử và không sinh bào tử), chúng tôi đã ch n các chủng vi nấm đƣợc bảo quản trong glycerol lạnh để hồi phục, nhằm mục đích có đƣợc số vi nấm sống sót cao hơn so với phƣơng pháp bảo quản trên silicagel (thích hợp với các chủng vi nấm sinh bào tử). Kết quả phục hồi cụ thể đƣợc thể hiện ở Phụ lục 1.
Trong số 67 chủng vi nấm có khả năng sinh tổng hợp collagenase, chúng tôi đã phục hồi đƣợc 47 chủng, đạt tỷ lệ 70,1%. Các chủng vi nấm sống sót này thuộc 9 chi, 32 lồi. Kết quả phục hồi 47 chủng vi nấm này nhƣ sau: Phục hồi rất tốt có 9 chủng (19%); Phục hồi tốt có 28 chủng (60%); Phục hồi khá có 10 chủng (21%). Kết quả này cho thấy, với thời gian bảo quản 4-5 năm, tỷ lệ sống sót của các chủng vi nấm có khả năng sinh tổng hợp collagenase giảm khá mạnh.
Từ 47 chủng vi nấm đƣợc hoạt hóa ở trên, 30 chủng vi nấm thuộc 9 chi, 27 loài đã đƣợc lựa ch n và tiến hành xác đ nh hệ số phân giải. Kết quả chi tiết thể hiện ở Phụ lục 2. Các lựa ch n này đảm bảo nguyên tắc: đa dạng tối đa các chi, loài vi nấm.
Trong số 30 chủng vi nấm này, chúng tôi lựa ch n tiếp 15 chủng đại diện, có hệ số phân giải cao để tiến hành nghiên cứu. Danh sách các chủng vi nấm với khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của chúng thể hiện ở ảng 3.1.
Bảng 3.1: Danh sách 15 chủng vi nấm lựa chọn nghiên cứu Chi vi nấm TT Ký hiệu Tên chủng Hệ số phân giải Colagen(IC) Aspergillus 1 T38 A. clavato-nanica Batista 6,4
2 T65 A. silvaticus Fennell and Raper 6,6
3 T116 A. asperescens Stolk 5,9
4 D45 A. ustus Thom and Church 5,3
Acremonium 5 T104 Acr.ochraceum Gams 3,6
Cladosporium 6 T44 C. cladosporioides (Fres.) de Vries 4,7
Didymostilbe 7 D132 Didymostilbe sp. 3,9
Gloeospoium 8 D160 Gloeospoium sp. 1,9
Nectria 9 D94 N. inventa Pethybridge 2,3
Penicillium 10 T72 P. cyaneo-fulvum Biourge 15,5 11 T142 P. chrysogenum Thom 9,7 12 D71 P. cacei Staub 17,8 13 D100 P. italicum Wehmer 9,0 14 D148 P. citrinum Thom 10,7
Scopulariopsis 15 D162 S. chartarum Morton and Smith 4,0 Qua ảng 3.1 cho thấy, các chủng vi nấm thuộc 8 chi, 15 lồi. Trong đó chi
Aspergilus có 4 chủng chiếm 27%, chi Penicilium có 5 chủng chiếm 33%, các chi
cịn lại mỗi chi có 1 chủng chiếm 7%. Tỷ lệ này cũng khá tƣơng đồng với cơ cấu của 67 chủng vi nấm ban đầu. Đó là, hai chi Aspergillus và chi Penicillium là các
chi vi nấm chủ yếu, chiếm tỷ lệ số chủng lần lƣợt là 32% và 37%.
Các chủng cũng đƣợc xác đ nh lại đặc điểm hình thái, để đánh giá lại chính xác tên lồi trƣớc và sau khi phục hồi các chủng phục vụ cho nghiên cứu. Đặc điểm hình thái cụ thể nhƣ sau: