- Môi trƣờng xác đ nh khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của vi nấm: Nutrient agar 0,1% cơ chất collagen.
15. Chủng Scopulariopsis chartarum Morton and Smith (D162)
3.6. Kết quả nghiên cứu xác định tổ hợp các điều kiện môi trƣờng ức chế khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của các chủng vi nấm
khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của các chủng vi nấm
Nghiên cứu sự ức chế khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của 15 chủng vi nấm bởi ĐKTH (nhiệt độ = 160
C ± 0,20C; RH = 70% ± 3%; pH = 8,5 ± 0,1; aw = 0,65 ± 0,01), chúng tôi thu đƣợc kết quả ở ảng 3.17 sau.
Bảng 3.17. Kết quả nghiên cứu xác định khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase 15 chủng vi nấm ở ĐKTH TT Tên chủng Đƣờng kính khuẩn lạc (mm) Đƣờng kính vịng phân hủy (mm) Hệ số I (Ith) 1 A. asperescens 0 - - 2 A. clavato-nanica 0 - - 3 A. silvaticus 0 - - 4 A. ustus 0 - - 5 Acr.ochraceum 0 - - 6 C. cladosporioides 0 - - 7 Didymostilbe sp. 0 - - 8 Gloeospoium sp. 0 - - 9 N. inventa 0 - - 10 P. cacei 0 - - 11 P. chrysogenum 0 - - 12 P. citrinum 0 - - 13 P. cyaneo-fulvum 0 - - 14 P. italicum 0 - - 15 S. chartarum 0 - -
Ghi chú: (0): Không sinh trƣởng sau 30 ngày nuôi cấy. (-): Không xác đ nh đƣợc.
Nhận xét: ĐKTH (nhiệt độ = 160C ± 0,20C; RH = 70% ± 3%; pH = 8,5 ± 0,1; aw = 0,65 ± 0,01) đã ức chế hoàn toàn khả năng phát triển cũng nhƣ khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của 15 chủng vi nấm nghiên cứu.
Để so sánh các điều kiện môi trƣờng ảnh hƣởng tới khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase thì cần thiết phải so sánh với điều kiện chứng ban đầu. Tổng hợp các kết quả nghiên cứu về các điều kiện môi trƣờng độc lập ức chế khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của vi nấm và điều kiện chứng ban đầu có ảng 3.18 nhƣ sau.
Bảng 3.18. Giá trị hệ số phân giải collagen của 15 chủng vi nấm ở các điều kiện độc lập tương ứng với ĐKTH
TT Chủng Hệ số phân giải cơ chất (I) ở các điều kiện Chứng T= 160C aw=0.65 RH=70% pH=8.5 1 A. asperescens 6,4 0 0 4,2 4,0 2 A. clavato-nanica 6,6 7,7 0 6,2 4,5 3 A. silvaticus 5,9 8,1 0 4,6 5,4 4 A. ustus 5,3 4,2 0 3,2 3,5 5 Acr.ochraceum 3,6 3,3 0 8,3 2,6 6 C. cladosporioides 4,7 1,8 0 4,4 4,2 7 Didymostilbe sp. 3,9 4,4 0 4,1 5,7 8 Gloeospoium sp. 1,9 0 0 1,6 1,8 9 N. inventa 2,3 3,6 0 2,9 1,5 10 P. cacei 15,5 9,3 0 12,4 6,4 11 P. chrysogenum 9,7 1,6 0 7,1 7,3 12 P. citrinum 17,8 0 0 10,7 4,8 13 P. cyaneo-fulvum 9,0 3,5 0 12,4 6,8 14 P. italicum 10,7 8,0 0 6,5 5,9 15 S. chartarum 4,0 0 0 1,4 1,4 X 7,15 3,7 0 6,00 4,39 SD 4,64 3,26 0 3,59 1,92 p <0,05 <0,05 >0,05 <0,05
Trong các phần trƣớc đã trình bày, điều kiện hoạt độ nƣớc thấp nhỏ hơn 0,7aw có thể ức chế hồn toàn sự phát triển của 15 chủng vi nấm nghiên cứu, Khơng có điều kiện mơi trƣờng nào khác trong nghiên cứu (nhiệt độ, độ ẩm, pH) có thể ức chế hoàn toàn tất cả 15 chủng vi nấm phát triển mà chỉ ức chế làm giảm tốc độ phát triển ở các mức độ khác nhau,
Qua ảng 3.18 cho thấy, giá tr hoạt độ nƣớc 0,65 ức chế hoàn toàn cả 15 chủng vi nấm, Ở các điều kiện khác (nhiệt độ 160C, độ ẩm 70%, pH 8,5) các chủng vi nấm nghiên cứu đều có khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase. Ở điều kiện 160C có tới 4 chủng vi nấm b ức chế hoàn toàn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase, cịn ở các điều kiện độ ẩm 70% và pH = 8,5 khơng có chủng nào b ức chế, Kết hợp với so sánh các giá tr trung bình của hệ số I thấy rằng, trong các yếu tố môi trƣờng, hoạt độ nƣớc mơi trƣờng ni cấy có ảnh hƣởng ức chế lớn nhất, sau đó là nhiệt độ và cuối c ng là pH và độ ẩm,
Nhƣ các phần trên đã đề cập, việc đánh giá các điều kiện môi trƣờng ức chế khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase là chƣa thấy có ở trong và ngồi nƣớc. Tuy nhiên, có những nghiên cứu tƣơng đƣơng trong thực hiện nhiệm vụ của Viện 69 đã chỉ ra rằng, tổ hợp điều kiện (nhiệt độ = 160C ± 0,20C; RH = 70% ± 3%; pH = 8,5 ± 0,1; aw = 0,65 ± 0,01) vẫn là điều kiện lý tƣởng cho ức chế sinh tổng hợp và hoạt tính các enzyme của vi nấm [1,2,8,9].
KẾT LUẬN
Từ kết quả nghiên cứu, chúng tơi có một số kết luận sau:
1. Đã phục hồi và lựa ch n đƣợc 15 chủng vi nấm đại diện, có khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase tốt nhất từ bộ sƣu tập tại Viện 69 làm đối tƣợng nghiên cứu.
2. Xác đ nh pH môi trƣờng nuôi cấy ức chế vi nấm:
- Độ pH 8,0 ức chế hoàn toàn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của một trong số 15 chủng vi nấm.
- Hai độ pH 8,5 và 9 khơng ức chế hồn tồn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của tất cả 15 chủng vi nấm.
3. Xác đ nh nhiệt độ ức chế vi nấm:
- Điều kiện nhiệt độ 140C và 180C, mỗi điều kiện chỉ ức chế hoàn tồn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của một chủng vi nấm.
- Điều kiện nhiệt độ 160C ức chế hoàn toàn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của bốn chủng vi nấm.
4. a điều kiện hoạt độ nƣớc: 0,60aw; 0,65aw; 0,70aw ức chế hoàn toàn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của tồn bộ 15 chủng vi nấm, ức chế không cho vi nấm nảy mầm, phát triển khi nuôi cấy tới ngày thứ 30.
5. Cả ba điều kiện độ ẩm mơi trƣờng khơng khí 60%; 70%; 80% đều khơng ức chế hồn tồn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của 15 chủng vi nấm.
6. Tổ hợp điều kiện môi trƣờng (t =160
C, RH = 70%, pH = 8.5, aw = 0,65) ức chế hoàn tồn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của tồn bộ 15 chủng vi nấm, ức chế không cho vi nấm nảy mầm, phát triển khi nuôi cấy tới ngày thứ 30.
Tổ hợp này là điều kiện tối ƣu gây ức chế quá trình phát triển, sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của15 chủng vi nấm nghiên cứu. Trong bốn yếu tố, vai trò ức chế của hoạt độ nƣớc là lớn nhất.
KIẾN NGHỊ
Qua quá trình thực hiện và những kết quả của đề tài, chúng tôi kiến ngh một số vấn đề sau:
1. Tiến hành nghiên cứu sâu hơn với nhiều dải giá tr của mỗi điều kiện. Xây dựng ma trận các điều kiện để có thể nghiên cứu với từng lồi hoặc nhóm nấm ph hợp.
2. Có thể nghiên cứu thêm các loại hóa chất khử tr ng ức chế khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính phân hủy cơ chất sinh h c của vi nấm.
3. Mở rộng nghiên cứu với số lƣợng nhiều hơn, với cả các lồi vi nấm ƣa khơ, với các loại enzyme khác của vi nấm để dự báo khả năng thích nghi và mức độ gây hại của chúng. Đồng thời rút ra quy luật ảnh hƣởng ức chế khả năng phát triển, sinh tổng hợp và hoạt tính enzyme vi nấm và quần thể vi nấm.