- Môi trƣờng xác đ nh khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của vi nấm: Nutrient agar 0,1% cơ chất collagen.
15. Chủng Scopulariopsis chartarum Morton and Smith (D162)
3.2.4. Xác định mối tương quan giữa điều kiện pH môi trường nuôi cấy với khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của các chủng vi nấm nghiên cứu.
khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của các chủng vi nấm nghiên cứu.
Mặc d chỉ thí nghiệm với 3 giá tr pH, chúng tơi vẫn phân tích mối tƣơng quan giữa sự thay đổi của pH ở v ng kiềm (8,0; 8,5; 9,0) với khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của mỗi chủng vi nấm. Mục đích là để tìm ra quy luật ức chế vi nấm gây hại bằng cách thay đổi độ pH của mơi trƣờng. Kết quả phân tích thể hiện ở ảng 3.5 nhƣ sau.
Bảng 3.5. Mối tương quan giữa pH ở vùng kiềm với khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của 15 chủng vi nấm
TT Chủng Hệ số phân giải trung bình ở các điều kiện Hệ số tƣơng quan (R) IpH8 IpH8,5 IpH9
1 A. asperescens 2,6 4,0 6,1 0,99 2 A. clavato-nanica 4,6 4,5 4,8 0,66 3 A. silvaticus 5,7 5,4 9,0 0,83 4 A. ustus 3,0 3,5 3,0 -0,12 5 Acr.ochraceum 4,5 2,6 4,6 0,04 6 C. cladosporioides 3,9 4,2 4,6 0,99 7 Didymostilbe sp. 4,6 5,7 3,4 -0,52 8 Gloeospoium sp. 1,7 1,8 1,9 1,00 9 N. inventa 2,1 1,5 1,7 -0,66 10 P. cacei 11,2 6,4 10,2 -0,19 11 P. chrysogenum 8,5 7,3 7,8 -0,58 12 P. citrinum 4,6 4,8 5,6 0,95 13 P. cyaneo-fulvum 9,2 6,8 7,7 -0,62 14 P. italicum 11,5 5,9 8,3 -0,57 15 S. chartarum 0,0 1,4 1,7 0,94
Theo ý nghĩa của hệ số tƣơng quan r: nếu r dƣơng tức tƣơng quan thuận, nếu r âm tƣơng quan ngh ch; nếu r 0,9 thì có tƣơng quan rất chặt chẽ giữa giá tr pH với khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của vi nấm; nếu 0,7 < r < 0,9 có mối tƣơng quan chặt chẽ; nếu 0,5 <r 0,7 có mối tƣơng quan trung bình; nếu 0,3< r 0,5 ta có tƣơng quan yếu; nếu 0 r 0,3 có tƣơng quan rất yếu. Đây là cơ sở để rút ra quy luật về sự ức chế của pH với khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của các chủng vi nấm nghiên cứu.
Khi nghiên cứu điều kiện pH ảnh hƣởng tới hoạt tính collagenase của vi nấm, nhiều tác giả nhận thấy rằng pH là một trong các yếu tố ảnh hƣởng rất quan tr ng. Ngƣời ta thấy rằng đa số vi nấm là các vi sinh vật ƣa mơi trƣờng có tính axit; ở điều kiện pH kiềm chúng phát triển kém hơn. Mặt khác, mỗi lồi, thậm chí mỗi chủng vi nấm thƣờng có điều kiện pH tối ƣu, tối đa, tối thiểu riêng khơng giống với lồi, chủng khác. Sự đa dạng này là đặc điểm gây khó khăn cho việc tìm ra đƣợc quy luật xác đ nh điều kiện pH tối thiểu, tức pH giới hạn, có thể ức chế hồn toàn một quần thể vi nấm nhất đ nh [5].
Susan Schenck và cộng sự nghiên cứu hoạt tính collagenase của vi nấm phân lập từ giun đất Arthrobotrys amerospora thấy rằng enzyme có thể hoạt động ở pH từ 2,5-10, b bất hoạt ở pH 11(ở 370
C) [26]. Zhao Minglian nghiên cứu với nấm giun đất Arthrobotrys oligospora thấy ở pH 6-8 thì hoạt tính enzyme đạt tối ƣu,
nhƣng không nghiên cứu giới hạn ức chế [28]. John W. Rippon nghiên cứu loài nấm da Trichophyton schoenleinii cho thấy ở 4 pH: 5,5; 6,5; 7,5; 8,5 thì pH6,5 hoạt tính enzyme là cao nhất, các mức khác có hoạt tính enzyme thấp hơn. Tác giả không nghiên cứu giá tr pH ức chế hồn tồn hoạt tính collagenase của vi nấm [21]. Sukhosyrova E. A và cộng sự nghiên cứu với loài Aspergillus flavus thấy rằng hoạt tính enzyme collagenase có ở pH 5.5, 6.5; đạt giá tr cao nhất ở pH 7.5 và giảm nhẹ ở pH kiềm 8.5. Các tác giả không chỉ ra pH ức chế hồn tồn hoạt tính collagenase của A. flavus [25]. Nhƣ thế, với mục đích nghiên cứu của mình các tác giả có xác đ nh những giá tr pH ảnh hƣởng tới hoạt tính enzyme. Tuy nhiên, để nghiên cứu
tìm ra quy luật về giá tr pH ức chế khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của vi nấm thì chƣa thấy có cơng bố.
Trong nghiên cứu này, chúng tơi thấy có thể phân loại các chủng vi nấm thành 3 nhóm có hệ số I (khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase) thấp (<4) ở một giá tr pH nhất đ nh (8,0; 8,5; 9,0).
Ở giá tr pH8: có 6 chủng có khả năng tổng hợp và hoạt tính collagenase thấp đó là S. chartarum, N. inventa, Gloeospoium sp., C. cladosporioides, A. ustus, A. asperescens.
Ở giá tr pH8,5: có 5 chủng thấp là S. chartarum, N. inventa, Gloeospoium
sp., Acr.ochraceum, A. ustus.
Ở giá tr pH9,0: có 5 chủng thấp là S. chartarum, N. inventa, Gloeospoium
sp., Didymostilbe sp. A. ustus.
Nhƣ vậy có 4 chủng (S. chartarum, N. inventa, Gloeospoium sp., A. ustus) có hệ số phân giải thấp ở các giá tr pH nghiên cứu.
Phân tích tƣơng quan: tƣơng quan thuận rất chặt chẽ có 5 chủng pH càng cao (trong giới hạn nghiên cứu này) thì khả năng tổng hợp và hoạt tính collagenase càng cao, pH thấp có tác dụng ức chế. Có 02 chủng có mối tƣơng quan thuận chặt chẽ và trung bình. Có 01 chủng có mối tƣơng quan rất yếu. Có 07 chủng có mối tƣơng quan ngh ch, trung bình, yếu và rất yếu. Điều đó nói lên tính đa dạng về tính chất sinh h c của vi nấm.
Nhƣ thế, trong nghiên cứu xác đ nh pH ức chế khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của 15 chủng vi nấm cho thấy:
- Điều kiện pH 8 có 1 chủng b ức chế hoàn toàn khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase; có 4 chủng khác b ức chế khơng hồn tồn. Có mối tƣơng quan thuận, rất chặt chẽ giữa pH với khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase của vi nấm.
- Điều kiện môi trƣờng nuôi cấy pH 8,5 có 46% số chủng vi nấm có giá tr khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase thấp. Tuy nhiên, khơng có chủng
nào b ức chế hoàn toàn; mối tƣơng quan giữa pH và khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase khơng có ý nghĩa thống kê.
- Điều kiện mơi trƣờng pH 9 có 2 chủng vi nấm có giá tr khả năng sinh tổng hợp và hoạt tính collagenase thấp nhất, khơng có chủng nào b ức chế hồn tồn. Mối tƣơng quan xác đ nh khơng có ý nghĩa thống kê.