CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU
1.3. Chủng virút sản xuấtvắc xin Viên não Nhật Bản
1.3.5. Dịng tế bào ni cấy (nhân) virút
Vi rút có khả năng nhân lên trên nhiều dịng tế bào. Tuy nhiên được phép sử dụng để sản xuất vắc xin chỉ có 1 số dịng tế bào có nguồn gốc từ động vật như thận khỉ, thận bò, phơi gà; Các dịng tế bào lưỡng bội của người (MRC5, KMB17) và khỉ (WI38, FRhL2); các dòng tế bào thường trực: Vero, CHO.
Tế bào thận khỉ xanh Phi Châu- Vero
Được thiết lập từ năm 1962 do hai tác giả người Nhật Bản là Yasumura và Kawakita. Đây là tế bào có nguồn gốc từ thận khỉ xanh Châu Phi tuổi trưởng thành. Mỹ giữ quyền kinh doanh tế bào Vero CCL81 ở đời thứ 123 và được xem như dòng tế bào thuộc ngân hàng tế bào của Mỹ - American type culture collection (ATCC) – tiếp tục nhân truyền đến đời thứ 130 thì thiết lập ngân hàng tế bào sản xuất (WCB). Thử nghiệm an toàn sinh học của tế bào được thực hiện tại Tektagen Inc, USA. Từ năm 1980, Viện Merieux (Pháp) sản xuất được 4 WCB đời 137. Dòng tế bào này nhận từ ATCC tháng 5/1979 ở đời thứ 124. Tế bào Vero đã được sử dụng sản xuất vắc xin dại và vắc xin Polio bất hoạt. Ba loạt tế bào WCB đã được kiểm tra theo yêu cầu của TCYTTG, tất cả 3 loạt đều đạt tiêu chuẩn:
An toàn và tinh khiết: Thử nghiệm trên động vật, trứng gà ấp dở, kết hợp nuôi cấy trên tế bào phôi người và quan sát biến đổi trên kính hiển vi điện tử.
Không gây u bướu: Thử nghiệm trên chuột cống sơ sinh ít nhất 10 lần và cấy truyền đến đời 169 mà khơng gây hình thành u bướu trên động vật thí nghiệm.
Di truyền: Khơng biến đổi gen qua nhiều đời cấy truyền đến WCB. Các mẫu thử MCB và WCB đều đạt tất cả các yêu cầu:
Vô trùng (Không nấm và vi khuẩn); Mycoplasma: (âm tính); Tiêu bản hiển vi điện tử (Khơng quan sát thấy các thành phần giống vi rút); Thử nghiệm vi rút ngoại lai in vitro(Khơng chứng minh có nhiễm với vi rút); Khơng phát hiện các mầm bệnh từ bị; Khơng phát hiện thấy Porcin Parvovirus; Không phát hiện tạo u đến đời 169; Xác định nguồn gốc từ thận khỉ xanh Châu phi.
Nhiều nghiên cứu về di truyền tế bào, các biến đổi nhiễm sắc thể (NST) trong tế bào Vero sau khi nuôi cấy nhiều lần trên microcarrier, kết quả đều thấy khơng có sự biến đổi… Còn rất nhiều nghiên cứu khác của các nhà khoa học trên thế giới về tế bào Vero và cuối cùng đều đi đến kết luận: Dòng tế bào Vero đạt tất cả các yêu cầu an toàn để sử dụng sản xuất vắc xin dùng cho người. Đời cấy truyền cho phép đưa vào sản xuất là P142 (năm 2000), hiện tại cho phép đến đời 150 (WHO TRS 878). Dòng tế bào này đã được sử dụng để sản xuất 100 triệu liều vắc xin bại liệt bất hoạt trong 12 năm, hơn 20 triệu liều vắc xin Dại sử dụng trong 10 năm và hơn 1 tỷ liều vắc xin bại liệt uống (OPV) sử dụng trong 6 năm ở nhiều nước đều rất an toàn và đảm bảo chất lượng.
Vì vậy chọn tế bào Vero CCL81 của TCYTTG là dòng tế bào tối ưu cho sản xuất vắc xin vi rút [29, 59, 60].
Tại Vabiotech, tế bào vero CCL81 của WHO đời 134 (2 ống) được nhập về Việt nam, từ đó nhân lên làm tế bào gốc MCB đời 137 (chỉ có 100 ống) để phục vụ cho nghiên cứu và sản xuất. Sử dụng 2 ống đời 137 nhân lên đời 139 làm WCB (200 ống). Từ đời 139 sẽ nhân lên đến đời 142 để đưa vào sản xuất.
1.4. Các khuyến cáo của TCYTTG cho sản xuất và kiểm định chủng sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt[22]