CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN NGHIÊN CỨU
1.5. Tóm tắt quy trình thiết lập ngân hàng chủng (Beijing-1) đểsản xuấtvắc xin
Quá trình thiết lập các ngân hàng chủng cho sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt trên tế bào Vero, chủng Beijing-1 (JECEVAX) được tiến hành qua các giai đoạn sau: Giai đoạn 1: Nghiên cứu thiết lập hệ thống ngân hàng chủng cùng với việc xây dựng quy trình sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt trên tế bào Vero (năm 2006 -2012 - Đề tài cấp Bộ Y tế):
+ Từ năm 2006-2010: Nghiên cứu thích ứng chủng vi rút Beijing-1 trên tế bào Vero để tạo chủng vi rút đủ điều kiện cho phát triển và sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt trên tế bào Vero tại Vabiotech
+ Từ tháng 4/2010: bắt đầu thiết lập chủng gốc và chủng sản xuất để sản xuất thử nghiệm các loạt vắc xin nhằm xây dựng quy trình sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt trên tế bào Vero tại VABIOTECH.
Giai đoạn 2: Sử dụng hệ thống chủng đã được thiết lập sản xuất các loạt vắc xin cho các nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng giai đoạn I, II, IIB & III tại Việt Nam (Năm 2013-2018 - Đề tài cấp Nhà nước); kiểm tra đánh giá tính ổn định của chủng beijing-1 và vắc xin JECEVAX sau sản xuất ở quy mơ phịng thí nghiệm.
Giai đoạn 3: Tổng hợp các dữ liệu đã có để hồn thiện, xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho ngân hàng chủng sản xuất, vắc xin.
Ngân hàng chủng vi rút là một phần quan trọng của quá trình sản xuất một sản phẩm sinh học nói chung và vắc xin nói riêng. Việc thiết lập Ngân hàng chủng vi rút đảm bảo nguyên liệu liên tục cho sản xuất vắc xin là cần thiết. Cụ thể, trong nghiên cứu này, chủng Beijing-1 được nhận từ viện Kanonji thuộc Trường đại học Osaka, Nhật Bản cũng đã qua 41 đời cấy chuyển (P41) để tạo chủng an toàn, hiệu quả. Beijing-1 cũng đang được sử dụng để sản xuất các vắc xin VNNB ở Nhật Bản. Về Việt Nam, chủng Beijing-1 P41 chúng tơi coi đó là P0, tính đến 2020 đã qua thêm 7 đời cấy chuyển (tương ứng với P48 từ chủng gốc), đời đầu tiên (P1) kích ứng trên não chuột, các đời tiếp theo nhân lên trên tế bào Vero như hình 1.6.
Hình 1. 6. Sơ đồ thiết lập ngân hàng chủng gốc (BV-MSV-0210) và chủng sản xuất
(BV-WSV-0310) "P": Passage, đời cấy chuyển.
Như vậy, tại thời điểm nghiên cứu năm 2017, số đời cấy chuyển của lô chủng gốc BV-MSV-0210 là 6 lần (tương ứng với đời số P47 tính từ chủng chuẩn gốc Beijing-1 Kanonji) và số đời cấy chuyển của lô chủng sản xuất BV-WSV-0310 là 7 (tương ứng với đời số P48 tính từ chủng chuẩn gốc Beijing-1 Kanonji).
Sau khi các nghiên cứu thích ứng chủng và xây dựng được các ngân hàng chủng và chủng sản xuất cho sản xuất vắc xin, một việc rất quan trọng cần được tiến hành đó là xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và các phương pháp kiểm tra chất lượng chủng. Điều này sẽ giúp cho nhà sản xuất khẳng định chất lượng hệ thống chủng sử
Chủng P2 (43)
1 ml/tuýp, Hiệu giá 1,75 .107PFU/ml Cấy chuyển trên tế bào Vero
Chủng P1 (42)
2 ml/tuýp, Hiệu giá 2,6.109 PFU/ml Cấy chuyển 1 lần trên tế bào Vero
Chủng chuẩn gốc P0 (41)
Hiệu giá 1,6.109PFU/ml Cấy chuyển 1 lần trên não chuột
Chủng P5 (46)
1 ml/tuýp, Hiệu giá 1,4 .107PFU/ml Cấy chuyển trên tế bào Vero
Chủng P4 (45)
1 ml/tuýp, Hiệu giá 2,5 .106PFU/ml Cấy chuyển trên tế bào Vero
Chủng P3 (44)
1 ml/tuýp, Hiệu giá 1,8 .107PFU/ml Cấy chuyển trên tế bào Vero
Chủng P7 (48) (Chủng sản xuất BV-WSV-0310)
1 ml/tuýp, Hiệu giá 3,93 . 107 PFU/ml Bảo quản nitrogen lỏng
Chủng P6 (47) (Chủng gốc BV-MSV-0210)
dụng trong sản xuất vắc xin từ đó khẳng định được chất lượng của vắc xin sản xuất ra. Các nghiên cứu nhằm xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và các phương pháp kiểm tra chất lượng cũng như các đánh giá về tính ổn định hiệu giá và di truyền của chủng qua các đời cấy chuyển sẽ giúp nhà sản xuất hoàn thiện các hồ sơ về sản phẩm để sử dụng trong việc phê duyệt thử nghiệm lâm sàng, đăng ký lưu hành sản phẩm, kiểm tra chất lượng và xuất xưởng cho sử dụng sản phẩm. Các nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và các phương pháp kiểm tra chất lượng chủng được tiến hành độc lập sau khi đã thiết lập được hệ thống chủng và được tiến hành theo các phương pháp hồi cứu, tiến cứu hoặc kiểm chứng lại các kết quả đã công bố để khẳng định chất lượng từ đó xây dựng lên các tiêu chuẩn chất lượng theo quy định đối với các ngân hàng chủng cho sản xuất vắc xin VNNB bất hoạt trên tế bào Vero.
CHƯƠNG 2
ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU