4.1.2. Thành phần bệnh hại trên cây gừng tại Hà Nội và Lạng Sơn
Qua quá trình điều tra thành phần bệnh hại trên gừng vào vụ Xuân năm 2017 tại Lạng Sơn và Hà Nội, do khuôn khổ thực hiện đề tài, chúng tôi điều tra ở những vùng trồng gừng quy mô chưa được lớn. Vì vậy, không phát hiện thấy bệnh hại trên cây gừng ở cả 2 vùng trong vụ Xuân này. Do vậy, đề tài tập trung nghiên cứu bệnh nấm hại trên cây nghệ.
4.2. NGHIÊN CỨU BỆNH THỐI GỐC RỄ TRÊN CÂY NGHỆ TẠI HƯNG YÊN
Bệnh thối gốc rễ trên các cây nghệ nói riêng và cây dược liệu nói chung do nhiều nguyên nhân gây ra như nấm, vi khuẩn, tuyến trùng,... Qua điều tra, tham khảo một số tài liệu và dựa vào triệu chứng điển hình của cây bị bệnh chúng tôi thấy nhóm tác nhân gây bệnh có nhiều đặc điểm gây bệnh liên quan đến nấm đất. Do vậy, trong quá trình xác định nguyên nhân gây bệnh chúng tôi tập trung đến nhóm tác nhân gây bệnh này.
4.2.1 Phân lập mẫu cây nghệ bị bệnh thối gốc rễ và mẫu đất trồng nghệ tại Hưng Yên
Qua việc đánh giá triệu chứng điển hình trên cây, chúng tôi nghi ngờ tác nhân gây bệnh có liên quan đến nấm đất đặc biệt là nấm Pythium và
Phytophthora. Vì vậy, chúng tôi tiến hành phân lập trên cây bị bệnh và trên đất trồng nghệ.
Để phân lập được chính xác tác nhân gây bệnh thối gốc rễ trên nghệ tại Hưng Yên, chúng tôi tiến hành thu các mẫu cây bị bệnh ở các mức độ nhiễm bệnh khách nhau (hình 4.5). Tương ứng với mỗi mẫu cây bệnh, thu các mẫu đất trồng cây bệnh đó.
Nhằm hạn chế tối đa nấm hoại sinh mọc, cản trở quá trình phân lập tác nhân gây bệnh. Chúng tôi đã sử dụng một số môi trường chọn lọc (có bổ sung kháng sinh ức chế vi khuẩn và một số nấm hoại sinh) như môi trường chọn lọc
Phytophthora và Pythium, môi trường chọn lọc nấm Fusarium, môi trường WA có bổ sung kháng sinh streptomycin.
Năm mẫu nghệ thu tại Xã Chí Tân, Khoái Châu, Hưng Yên với mức độ biểu hiện triệu chứng khác nhau đã được thu thập để phân lập nấm gây bệnh (Hình 4.5).
Hình 4.5. Mẫu nghệ nhiễm bệnh ở các mức độ triệu chứng khác nhau tại Chí Tân – Khoái Châu - Hưng Yên (2017)
Kết quả phân lập trực tiếp từ mô bệnh của 5 mẫu cây nghệ bệnh (Bảng 4.2) được thu ở Hưng Yên đã phát hiện 3 loài nấm. Giám định sơ bộ đặc điểm hình thái trên kính hiển vi đã xác định: 1 loài là nấm Fusarium sp., 2 loài là
Pythium spp: loài thứ nhất ký hiệu là Py1, loài thứ 2 ký hiệu là Py2.
Bảng 4.2. Kết quả phân lập nấm từ mẫu Nghệ bị bệnh thối gốc rễ tại Chí Tân – Khoái Châu – Hưng Yên năm 2017
Mẫu nghệ Mức độ triệu chứng Bộ phận phân lập Kết quả phân lập WA + Streptomicin PDA1/4 + Pimaricin + Rifampicin M4 Nặng (gốc rễ thối, bộ lá biến vàng 80%)
Thân Py2 Py2
Củ Py1 Py1 Rễ Fusarium sp. Py2 M5 Trung bình (gốc rễ thối, bộ lá biến vàng 50%) Thân Py1 P1 Củ Py2 Py2 Rễ Py1 Py1 M6 Trung bình (gốc rễ thối, bộ lá biến vàng 50%) Thân Fusarium sp. 0 Củ Py1 Py1 Rễ Fusarium sp. Py1 M7 Nhẹ (gốc rễ thối, bộ lá biến vàng 10%)
Thân Py2 Py2
Củ Py2 Py2 Rễ Py2 Py2 M8 Nhẹ (gốc rễ thối, bộ lá biến vàng 10%) Thân Fusarium sp. 0 Củ Py1 Py1 Rễ Fusarium sp. Py1 Ghi chú:- Py1 là Pythium sp. thứ nhất
- Py2 là Pythium sp. thứ 2
Kết quả bẫy Pythium/Phytophthora từ đất vùng rễ cây nghệ bệnh bằng bằng quả táo, quả bầu và cánh hoa hồng (với 4 loại hoa có màu chọn 4 loại có màu sắc khác nhau: màu đỏ, màu hồng, màu trắng và màu vàng) được trình bày ở Bảng 4.3, Hình 4.6.
+ Đối với bẫy bầu, vết bệnh và tản nấm xuất hiện trên vết bẫy được bẫy từ đất thu của mẫu M5, M6 và M7.
+ Đối với bẫy cánh hoa hồng, vết bệnh và tản nấm đã xuất hiện từ mẫu M6, đặc biệt nhanh và rõ trên cánh hoa hồng trắng và vàng.
+ Đối với bẫy táo, vết bệnh đã xuất hiện từ mẫu M4, M5, M6, M 7.
Quan sát ở thời gian lâu hơn (1 tuần), tất cả mẫu đất đều tạo vết bệnh trên các loại mẫu bẫy. Tuy nhiên, vết bệnh đặc biệt trên táo và bầu liên kết với nhau dẫn tới không thể tách rời để phân tích.
Như vậy, kết quả bẫy nấm từ đất cho thấy chắc chắn có nấm Pythium hoặc
Phytophthora trong đất trồng nghệ. Để xác định được kết quả chính xác, chúng tôi tiếp tục phân lập các mẫu nhiễm trên bầu và cánh hoa hồng trên môi trường nhân tạo. Kết quả kiểm tra nấm từ vết bẫy cũng như từ nấm phân lập thuần cũng chỉ xác định được 2 loài Pythium là Py1 và Py2 giống như phân lập trực tiếp từ mô bệnh.
Bảng 4.3. Kết quả bẫy Phytophthora/Pythium từ đất vùng rễ cây nghệ bệnh thối gốc rễ thu tại Chí Tân – Khoái Châu – Hưng Yên năm 2017
(sau bẫy 3 ngày)
Mẫu Bẫy bằng táo Bẫy bằng bầu Bẫy bằng cánh hoa hồng Đỏ Vàng Hồng phấn Trắng M4 Nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm
M5 Nhiễm Nhiễm Không
nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm M6 Nhiễm Nhiễm Nhiễm Nhiễm Nhiễm
Nhiễm nhanh và nặng nhất
M7 Nhiễm Nhiễm Không
nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm M8 Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm Không nhiễm
Hình 4.6 Bẫy Phytophthora/Pythium từ đất vùng rễ cây nghệ bệnh thối gốc rễ thu tại Chí Tân – Khoái Châu – Hưng Yên năm 2017 bằng cánh hoa hồng, quả bầu và quả táo. Các hình bên trái là bố trí bẫy. Các hình bên phải
là vết bệnh hình thành trên bẫy sau sau 3 ngày (đại diện mẫu điển hình). 4.2.2 Đặc điểm hình thái nấm phân lập được trên cây nghệ bệnh tại Khoái Châu – Hưng Yên năm 2017
4.2.2 .1. Đặc điểm hình thái Pythium sp. 1 (Py1)
Các đặc điểm hình thái của mẫu Py1 được trình bày ở Bảng 4.4 và Hình 4.7.
Mẫu Py1 được nuôi cấy trên môi trường PDA, PCA và CMA đều có màu trắng, phát triển rất nhanh, tản nấm bông xốp, sau 2 ngày nuôi mẫu Py1 đã phát triển kín một đĩa môi trường (đường kính 90mm).
Bảng 4.4. Đặc điểm hình thái mẫu Pythium Py1 phân lập được trên cây nghệ bệnh thối gốc rễ tại Khoái Châu – Hưng Yên năm 2017
Cấu trúc Tiêu chí Mô tả
Tản nấm Màu sắc Trắng
Bề mặt Bông xốp, đều, nổi trên bề mặt
Bao cái (oogonium)
Hình dạng Hình cầu Kích thước 21 - 25 µm
Cách hình thành Hình thành ở đỉnh sợi
Vách Nhẵn
Cuống Không bẻ cong hướng về bao đực
Bao đực
(antheridium)
Hình dạng Dạng túi rộng, đều Kích thước (9 -11) x (13-15) µm
Cách hình thành Phần lớn ở giữa sợi, một số ở đỉnh Số lượng/bao cái Phần lớn 1, đôi khi 2
Bào tử trứng (Oospore)
Hình dạng Cầu
Khoảng trống với vách
bao cái Có (aplerotic) Kích thước 20 - 22 µm Bọc động bào tử
(sporangia)
Hình dạng Dạng sợi phồng, phân thùy rõ Cách hình thành Hình thành ở đỉnh sợi
Để quan sát các cấu trúc sinh sản, các viên môi trường CMA chứa nấm thuần được cho vào đĩa petri và nước cất vô trùng được cho vào đĩa. Trong điều kiện chỉ có nước cất vô trùng, mẫu Py1 hình thành nhiều cấu trúc sinh sản hữu tính bao gồm bao đực, bao trứng và bào tử trứng và không hình thành cấu trúc sinh sản vô tính. Bao cái (oogonium) hình cầu, kích thước 21 - 25 µm, hình thành ở đỉnh sợi, vách nhẵn và cuống thẳng. Bao đực (antheridium) dạng túi rộng, đều, kích thước (9 -11) x (13-15) µm, phần lớn hình thành ở giữa sợi, một số ở đỉnh, số lượng bao đực/bao cái phần lớn 1, đôi khi 2. Bào tử trứng (oospore) hình cầu, có khoảng trống cách biệt với vách bao cái (aplerotic), kích thước 20 - 22 µm. Sự hình thành cấu trúc sinh sản hữu tính từ mẫu nấm thuần chứng tỏ mẫu Py1 là loài đồng tản.
Để kích thích nấm sinh sản vô tính, dịch đất khử trùng và mảnh mô cánh hoa hồng trắng được bổ sung vào trong đĩa. Trong điều kiện này, nấm đã hình thành cấu trúc sinh sản vô tính. Bọc bào tử (sporangia) có dạng sợi phồng, phân thùy rõ, hình thành ở đỉnh sợi.