CHƢƠNG 2 : ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.1. Phƣơng pháp hồi cứu số liệu
Sử dụng phƣơng pháp hồi cứu số liệu để thu thập các thơng tin cơ bản sau:
- Điều kiện tự nhiên, kinh tế, mơi trƣờng khu vực nghiên cứu - Tình hình đánh bắt hải sản tại vịnh Đà Nẵng
- Tính chất, đặc tính gây hại của kim loại As, Cd, Pb
- Đặc điểm sinh học và sinh thái của các lồi cá - Một số phƣơng pháp đánh giá rủi ro sức khỏe
2.4.2. Phƣơng pháp thu mẫu và bảo quản mẫu
Thu mẫu cá: Tiến hành thu mua mẫu hai đợt tại địa điểm nghiên cứu. Mẫu sau khi thu thập đƣợc bảo quản lạnh trong thùng xốp và đƣa về bảo quản ở - 20oC tại phịng thí nghiệm Khoa Sinh - Mơi trƣờng, Trƣờng Đại học Sƣ phạm Đà Nẵng.
2.4.3. Phƣơng pháp định loại
Mẫu cá đƣợc định loại bằng phƣơng pháp so sánh hình thái, chủ yếu dựa vào Danh mục tên Thủy sản Việt Nam - nhĩm cá biển và theo sách “Mơ tả định loại cá Đồng bằng sơng Cửu Long, Việt Nam” của Trần Khắc Định, Nguyễn Thanh Phƣơng, Konosirus Punctatus và cộng sự.
2.4.4. Phƣơng pháp vơ cơ hĩa mẫu và phân tích mẫu
- Xác định khối lƣợng mơ bằng phƣơng pháp cân đo thơng thƣờng.
- Xử lý mẫu cá: Mẫu cá đƣợc rã đơng ở nhiệt độ phịng. Sau khi rã đơng, mẫu cá đƣợc rửa sạch bằng nƣớc cất. Sử dụng dao inor khơng gỉ để lấy thịt cá.
- Vơ cơ hĩa mẫu: Để phân tích hàm lƣợng KLN trong mẫu cá đã đƣợc xử lý sơ bộ, tơi tiến hành vơ cơ hĩa mẫu theo hƣớng dẫn của TCVN 6649:2000 [4].
0.001g cho vào bình phản ứng dung tích 250 ml. Làm ƣớt với khoảng từ 0.5 ml đến 1.0 ml nƣớc, vừa trộn vừa cho thêm 21 ml axit clohidric, sau đĩ cho thêm 7 ml axit nitric, nếu cần cho từng giọt một để hạn chế tạo bọt. Cho 15 ml axit nittric vào bình hấp thụ. Nối bình hấp thụ và bộ sinh hàn với bình phản ứng, để yên trong 16 giờ ở nhiệt độ phịng để quá trình oxi hố chất hữu cơ xảy ra.
+ Tăng nhiệt độ của hỗn hợp phản ứng từ từ cho đến khi đạt đƣợc các điều kiện hồi lƣu và duy trì trong 2h, đảm bảo rằng vùng ngƣng tụ thấp hơn 1/3 chiều cao của bộ sinh hàn, sau đĩ để nguội. Cho lƣợng hợp chất trong bình hấp thụ vào bình phản ứng qua bộ sinh hàn, tráng bình hấp thụ và bộ sinh hàn bằng 10 ml axit nitric.
+ Để yên bình phản ứng sao cho phần lớn cặn khơng tan của huyền phù lắng xuống, cẩn thận gạn một cách tƣơng đối chất nổi phía trên khơng chứa cặn sang giấy lọc whatman, thu lấy dịch lọc vào bình định mức 100 ml. Lọc tất cả dịch lọc ban đầu qua giấy lọc whatman, sau đĩ rửa cặn khơng tan trên giấy lọc whatman với một lƣợng axit nitric tối thiểu. Thu lấy dịch lọc này với dịch lọc thứ nhất
- Phƣơng pháp phân tích KLN: Mẫu sau khi đƣợc vơ cơ hĩa sẽ đƣợc phân tích xác định hàm lƣợng Cd, Pb bằng phƣơng pháp hấp thụ nguyên tử khơng ngọn lửa ở bƣớc sĩng 228 nm đối với Cd và bƣớc sĩng 283 nm đối với Pb theo hƣớng dẫn của TCVN 6496 : 2009 [5] và xác định hàm lƣợng As ở bƣớc sĩng theo 193 nm theo TCVN 8467:2010 [6] trên máy AAS analytik Jena 700P tại phịng thí nghiệm khoa Sinh- Mơi trƣờng, trƣờng Đại học Sƣ phạm Đà Nẵng.
2.4.5. Phƣơng pháp phỏng vấn cộng đồng
Để cĩ thơng số phục vụ cho đánh giá rủi ro sức khỏe, tơi sử dụng phƣơng pháp phỏng vấn bán cấu trúc và cấu trúc bằng phiếu điều tra. Tiến hành phỏng vấn 100 đối tƣợng ngƣời lớn từ 19 đến 60 tuổi và 100 đối tƣợng trẻ em vị thành niên từ 10 đến 18 tuổi, sống ở 2 khu vực ven Vịnh Đà Nẵng:
+ Khu vực 1 thuộc phƣờng Hịa Hiệp Bắc - quận Liên Chiểu.
+ Khu vực 2 thuộc phƣờng Thanh Khê Tây và Thanh Khê Đơng - quận Thanh
Hình 2. 8. Bản đồ khu vực phỏng vấn
Qua khảo sát cho thấy hai khu vực này cĩ mật độ dân số sống ven Vịnh cao và tiêu thụ cá đƣợc đánh bắt trên Vịnh nhiều.
Bảng câu hỏi đƣợc thiết kế tập trung chủ yếu các thơng tin cơ bản (tuổi, giới tính, năm sinh, địa chỉ, cân nặng); loại cá thƣờng đƣợc sử dụng; khối lƣợng cá tiêu thụ trung bình ngày; số lần sử dụng trong tuần.
2.4.5. Phƣơng pháp đánh giá rủi ro sức khỏe theo US-EPA
a. Thương số nguy hại THQ
Sử dụng thƣơng số THQ để đánh giá rủi ro sức khỏe của ngƣời tiêu thụ thực phẩm. THQ là thƣơng số giữa liều lƣợng của chất ơ nhiễm và liều lƣợng tham chiếu (liều lƣợng đƣợc cho là khơng cĩ nguy cơ tác động). Khi THQ < 1, khơng ảnh hƣởng đến sức khỏe ngƣời tiêu dùng. THQ > 1, rủi ro sức khỏe con ngƣời cao, cần quan tâm đến sử dụng thực phẩm trong nhu cầu ăn uống. Chỉ số THQ đƣợc xác định theo cơng thức sau [38], [50]:
THQ =
(1)
Trong đĩ:
Ef là tần suất phơi nhiễm (365 ngày/ năm) ED là tuổi thọ trung bình (năm)
FIR là lƣợng thức ăn tiêu thụ (kg/ngày) C là hàm lƣợng KLN trong cá (mg/kg)
RfD là liều lƣợng tham chiếu As = 0.0003 mg/kg/ngày, Cd = 0.001 mg/kg/ngày, Pb = 0.004 mg/kg/ngày.
BWA là trọng lƣợng của cơ thể (kg)
ATn là thời gian phơi nhiễm trung bình (365 ngày/năm x ED)
b. Chỉ số rủi ro HI
Nguy cơ ảnh hƣởng đến sức khỏe khơng chỉ riêng lẻ từng kim loại mà cĩ thể từ sự tƣơng tác của nhiều kim loại với nhau. Tổng THQ của tất cả KLN thử nghiệm đƣợc gọi là chỉ số rủi ro HI (Hazard index). Giá trị HI < 1, khơng ảnh hƣởng đến sức khỏe ngƣời tiêu dùng và ngƣợc lại, HI > 1, nguy cơ rủi ro cao đến sức khỏe ngƣời tiêu dùng. Chỉ số HI đƣợc tính dựa vào cơng thức sau [51]:
HI = ∑ (2) Trong đĩ: i là kim loại khác nhau đƣợc thử nghiệm.
2.4.6. Phƣơng pháp xử lý số liệu
Xử lý số liệu thống kê, mơ tả và so sánh giá trị trung bình, phân tích phƣơng sai ANOVA với mức ý nghĩa α = 0.05 bằng phần mềm MS Excel. Phân tích và vẽ biểu đồ bằng phần mềm Origin 8.5 và MS Excel.