3.2 Quá trình phân lập các chất từ dịch chiết n-hexane cây Trâu cổ
3.1.1 Khảo sát thành phần định tính và lựa chọn dung môi
+ Triển khai sắc ký lớp mỏng: Lấy một lượng nhỏ cặn dịch chiết n- hexane Trâu cổ hòa tan trong hỗn hợp n-hexane. Pha hệ dung môi (2 mL) rồi đổ vào bình triển khai sắc ký. Sử dụng bản mỏng với kích thước 15 mm x 40 mm. Đưa chất lên lớp mỏng bằng ống mao quản, cách đáy bản mỏng 6 mm và cách đều hai bên mép bản, để dung môi bay hết rồi đưa vào bình triển khai. Khi dung môi chạy lên cách mép trên của bản khoảng 3 mm thì lấy bản mỏng ra, sấy để dung môi bay hết.
+ Lập sắc ký đồ: Tiến hành lập sắc ký đồ trong các điều kiện sau: Quan sát dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng = 254 nm và 366 nm. Sau đó nhúng bản mỏng vào dung dịch thuốc thử Ce(SO4)2, sấy bản mỏng, quan sát dưới ánh sáng thường.
Lá cây Trâu cổ khô
(FPL; 5,8 kg)
n-Hexane, (10L, 24h)x5
Dịch chiết n-Hexane Mẫu cây
Cặn dịch chiết
n-Hexane
(FPLH; 97,1 g)
Chưng cất
dưới áp suất giảm
Ngâm tiếp với EtOAc, MeOH
-32-
Từ các khâu triển khai sắc ký lớp mỏng, lập sắc ký đồ thấy mỗi vết tách ra trên bản mỏng có một giá trị Rf khác nhau. Dựa trên sắc ký đồ, phân tích sơ bộ thành phần chiết để biết: Số lượng chất có trong cặn chiết, đánh giá sơ bộ khả năng phân tách chất của dung môi trên silicagel.
+ Kết quả sắc ký đồ:
Hệ các dung môi được triển khai gồm:
(I): CH2Cl2/n-Hexane ( 5%) (II): CH2Cl2 /n-Hexane (10%) (III): CH2Cl2 /n-Hexane (25%) (IV): CH2Cl2 /n-Hexane (35%) (V): CH2Cl2 /n-Hexane (50%) (VI): CH2Cl2 /n-Hexane (75%) (VII): CH2Cl2 /n-Hexane (100%) (VIII): EA/Hx (5%) (IX): EA/Hx(10%) (X): EA/Hx(25%) (XI): Ac/Hx(5%) (XII): Ac/Hx(10%) (XIII): EA/ CH2Cl2 (10%) (XIV): MeOH/ CH2Cl2 (5%)
Các bản mỏng sau khi được triển khai sắc ký, hiện màu bằng đèn tử ngoại sau đó nhúng vào dung dịch thuốc thử Ce(SO4)2 thu được kết quả tương ứng như sau (Hình 3.8):
-33-
(I), (II) (III) (IV)
(V) (VI) (VII)
(VIII) (IX) (X)
(XI) (XII) (XIII) (XIV)