-34-
Từ các kết quả so sánh trên cho ta thấy các chất được khai triển tốt nhất ở hệ dung môi (IV),(V),(VI),(VII),(VIII),(IX),(X),(XI),(XII),(XIII) và
(XIV). Các vệt chất đều hiện màu ở đèn tử ngoại với bước sóng =366 nm (một số vệt chất hiện màu ở cả bước sóng 254nm) và thuốc thử Ce(SO4)2.
UV-366 Ce(SO4)2
Hình 3.9: TLC cặn n-hexane Trâu cổ với hệ dung môi (VII)
Từ các bản mỏng khảo sát các vệt chất với hệ dung môi trên cho ta thấy các giá trị Rf của các vệt chất với hệ dung môi CH2Cl2 /Hexane 100% được trình bày cụ thể, rõ rệt trong Bảng 3.1
Bảng 3.1. Giá trị Rf và màu sắc các vệt chất trên bản mỏng
STT Rf Ce(SO4)2
UV
254 nm 366 nm
1 0,100 Xanh đen Nâu Hồng
2 0,325 Xanh đen Nâu (-)
3 0,613 Xanh đen (-) Trắng xanh
4 0,844 Xanh đen Nâu (-)
5 0,969 Xanh đen Nâu Vàng
(-): không hiện Rf = a/b
Trong đó: a là khoảng cách từ điểm xuất phát đến tâm vết mẫu thử(cm)
b là khoảng cách từ điểm xuất phát đến mức dung môi đo trên cùng đường đi của vết(cm)
-35- 0 < Rf < 1
Qua các sự khảo sát bản mỏng và sự hiện màu các vệt chất trong dung dịch Ce(SO4)2, ta lựa chọn hệ dung môi CH2Cl2 /Hexane 100% với độ phân cực tăng dần làm dung môi rửa giải cho cột tổng cặn n-Hexane của cây Trâu cổ.
3.2.1 Quá trình phân lập các chất
Giai đoạn 1: Chuẩn bị cột
Chọn cột có đường kính 10 cm, chiều dài 50 cm được rửa sạch, tráng cột bằng acetone, sấy khô, lót dưới đáy một ít bông. Chuẩn bị cột silica gel theo phương pháp nhồi cột ướt:
Sau đó cân 150 gam silica gel, ngâm trương nở ngập trong n-hexane
khoảng 30 phút, trong quá trình ngâm dùng đũa thủy tinh khuấy liên tục để đuổi hết bọt khí.
Dựng cột tráng qua cột một lớp axetone để cột khô nhồi bông vào cột. Rót từ từ hỗn hợp silica gel đã trương nở vào cột, vừa rót vừa vỗ nhẹ cột để đuổi hết bọt khí, để cột ổn định trong thời gian 3h.
Giai đoạn 2: Đưa chất lên cột
Từ 97,1 gam cặn chiết n-Hexane (kí hiệu FPLH) được hòa tan với CH2Cl2 vừa đủ cho tan hết, rồi đem trộn với khoảng 90 gam silica gel, làm bay hơi hết dung môi trên máy cất quay chân không đến khi thu được hỗn hợp bột tơi màu nâu đen.
Cho từ từ silica gel đã đính cặn vào cột, vừa cho vừa gõ nhẹ để phần silica gel phân bố đều vào cột (Hình 3.10 ).
-36-