Hình 3.6. Phổ HMBC của hợp chất KS1
Như vậy, từ dữ liệu phổ 1H- NMR, 13C-RMN, HSQC, HMBC của hợp chất KS1 so sánh với dữ liệu của hợp chất quercetin đã công bố của nhóm nghiên cứu
Dihydroxyphenyl-3,5,7-trihydroxy-4H-chromen-4-one hydrate) hay còn gọi là quercetin có công thức phân tử C15H10O7 và công thức cấu tạo như hình 3.7.
Hình 3.7. Cấu trúc hợp chất quercetin
3.2.2. Phân lập cấu trúc hợp chất KS2
Cấu trúc hợp chất KS2 được xác định dựa vào phổ 1H- NMR, 13C-NMR kết hợp so sánh với các tài liệu tham khảo.
Phổ 1H- NMR (500 MHz, Acetone D6) ) δH (ppm) có sự xuất hiện tín hiệu đặc trưng của một flavonoid, trong đó proton δH 6,18 (d) ghép meta với proton δH 6,37với hằng số ghép J = 2,0Hz) tương ứng với 2 proton H-6 và H-8; ba tín hiệu cộng hưởng của 4 proton [δH , 6,18 (1H, d, 2Hz); 6,37(1H, d, 2Hz); 7,24 (2H, s), thuộc vòng A. Còn proton δH 7,24 (2H, s) được dự đoán là H-2’, H- 6’ của vòng B.
Hình 3.9. Phổ 13C- NMR của KS2
Phổ 13C-NMR (500 MHz, Acetone D6) δH (ppm) cho thấy hợp chất KS2 có 12 tín hiệu cộng hưởng ứng với 15 carbon tương tự như hợp chất KS1, trong đó δC 175,7 pm đặc trưng cho nhóm carbonyl, tín hiệu δC 135,8 (C-3) đặc trưng cho carbon nối đôi liên kết với một nhóm hydroxyl.
Bảng 3.2. Độ dịch chuyển hóa học của proton trên Phổ 1H-NMR của các chất KS2 và myricetin [34] STT δH của myricetin (δ ppm) δC của myricetin (δ ppm) δH của KS2 (δ ppm) δC của KS2 (δ ppm) 2 159,5 160,6 3 136,5 135,8 4 179.6 175,7 5 163,3 160,6 6 6,17 (1H, d) 99,9 6,18 (1H, d) 102,9 7 165,9 163,0 8 6,37 (1H, d) 94,8 6,37 (1H, d,) 90,1 9 158,7 156,0 10 105,9 102,9 1’ 121,9 120,7 2’/6’ 7,21(1H, s) 110,7 7,24(1H, s) 107,1 3’/5’ 146.9 146,0 4’ 137.9 135,0
Các giá trị phổ 1H-NMR và -13C-NMR cho phép dự đoán KS2 là hợp chất có khung flavonoid. So sánh các dữ liệu phổ cộng hưởng từ của hợp chất KS2 với các dữ liệu phổ của hợp chất myricetin đã công bố [34], chúng tôi thấy có sự tương đồng. Từ đó chúng tôi khẳng định hợp chất KS2 myricetin (CTPT C15H10O8) có công thức cấu tạo như hình 3.10.
Hình 3.10. Cấu trúc hợp chất myricetin
Các kết quả nghiên cứu về hợp chất quercetin, myricetin cho thấy đây là các hợp chất flavonoid có khả năng cải thiện sức khỏe tim mạch, chống loãng xương, chống viêm và là chất chống oxy hóa tự nhiên do có khả năng hấp thụ gốc tự do, ngoài ra myricetin còn được dùng để bảo quản thực phẩm, kéo dài thời gian sử dụng cho những thực phẩm có chứa dầu và chất béo. [11], [15]
Việc phân lập được 2 hợp chất quercetin, myricetin từ lá chanh Thái đã góp phần khẳng định thêm những tác dụng dân gian đã được sử dụng của lá chanh Thái trồng tại Champasack, miền Nam Lào.
3.3. Xác định hàm lượng vitamin C trong lá và quả chanh Thái 3.3.1. Khảo sát điều kiện nghiên cứu 3.3.1. Khảo sát điều kiện nghiên cứu
Dựa vào kết quả nghiên cứu tài liệu [4] kết hợp khảo sát với mẫu chuẩn và mẫu thực chúng tôi lựa chọn điều kiện tối ưu cho phép xác định vitamin C trong lá và quả chanh Thái bằng phương pháp HPLC:
Cột tách: cột C18. Detector UV-Vis: λ = 248,3 nm. Tốc độ dòng chảy: 0,8 mL/phút. Thể tích bơm mẫu: 10 µL. Nhiệt độ phân tích: 300C. Pha động: CH3OH - KH2PO4 1% (v/v =15:85).
Thời gian chạy đối với mẫu vitamin C chuẩn là 10 phút, với mẫu cần khảo sát là 30 phút.
Hình 3.11. Sắc kí đồ 3D khảo sát bước sóng thích hợp của hợp chất vitamin C