Từ hình 3.14; 3.15. ta thấy có rất nhiều peak xuất hiện trên sắc kí đồ, trong đó có 1 peak có độ hấp thụ tốt nhất với khoảng thời gian lưu tương ứng với mẫu vitamin C chuẩn được đo trong cùng diều kiện. Vì vậy chúng tôi khẳng định đó
Bảng 3.5. Kết quả khảo sát độ lặp lại và hàm lượng vitamin C trong 100g lá và quả chanh Thái
Mẫu Lá Quả Diện tích peak Hàm lượng vitamin C (mg) Diện tích peak Hàm lượng vitamin C (mg) 1 158286 7,41 890728 21,50 2 156302 7,39 899901 21,63 3 155224 7,37 902110 21,67 4 150200 7,32 888202 21,46 5 158419 7,41 896568 21,58 Số liệu thống kê X= 7,38 S= 0,03 RSD = 0,43% X= 21,57 mg S= 0,09 RSD = 0,41 % Như vậy bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao, đã giúp chúng tôi xác định nhanh chóng, chính xác và nhất quán hàm lượng vitamin C trong lá và quả cây chanh Thái. Kết quả đã xác định được hàm lượng vitamin C trong có trong 100g quả (21,57 mg) lớn hơn rất nhiều hàm lượng vitamin C trong 100g lá chanh Thái (7,38 mg). Kết quả nghiên cứu này hoàn toàn phù hợp với các tài liệu đã công bố trước đây. [19]
3.4. Khảo sát độ đúng
Độ đúng của phương pháp được xác định bằng phương pháp thêm chuẩn. Thêm vào mẫu thử một lượng dung dịch chất chuẩn đã biết nồng độ. Dựa vào diện tích peak của các dung dịch này tính tỷ lệ thu hồi lượng chất chuẩn thêm vào. Lặp lại thí nghiệm với 5 lần khác nhau. Các dung dịch được sắc ký trong cùng điều kiện với dung dịch chuẩn. Kết quả thể hiện trong bảng 3.6.
Bảng 3.6. Kết quả khảo sát độ đúng Mẫu CX (µg/mL) CC (µg/mL) CT (µg/mL) Rev (%) Mẫu CX (µg/mL) CC (µg/mL) CT (µg/mL) Rev (%) 1 27,89 50 76,42 97,07 2 27,81 50 77,59 96,56 3 27,77 50 77,03 98,53 4 27,57 50 76,82 98,51 5 27,89 50 76,51 97,24
Trong đó: CX là nồng độ (µg/mL) của dung dịch vitamin C xác định trong mẫu chưa thêm chuẩn; CC là nồng độ (µg/mL) của dung dịch chuẩn vitamin C thêm vào mẫu (đã biết); CT là nồng độ (µg/mL) của dung dịch vitamin C xác định được trong mẫu sau khi thêm chuẩn; Rev là độ thu hồi.
Kết quả cho thấy phương pháp tìm lại có độ đúng cao với phần trăm tìm lại trung bình là 98,18%. Do đó chúng tôi kết luận phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao dùng để xác định hàm lượng vitamin C trong thực vật đạt yêu cầu về độ đúng.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1. Kết luận
Sau một thời gian thực nghiệm và nghiên cứu chúng tôi đã hoàn thành được các nhiệm vụ của đề tài và thu được các kết quả sau:
1. Đã chiết xuất được các cao chiết tổng số etanol, n-hexan, etylacetat. 2. Đã phân lập 02 chất sạch trong cao etylacetat.
3. Thực nghiệm đo phổ 1H-NMR, 13C-NMR và DEPT, HSQC và HMBC xác định được cấu trúc của hợp chất SK1 là quercetin và hợp chất KS2 là myricetin
4. Xây dựng được điều kiện tối ưu cho phép xác định nhanh, chính xác hàm lượng vitamin C trong mẫu nghiên cứu chanh Thái theo phương pháp HPLC.
5. Định lượng được hàm lượng vitamin C trong lá (7,38 mg/100g) và quả chanh Thái (21,57 mg/100g) trồng tại tỉnh Champasack, miền Nam Lào
2. Kiến nghị
Trong lá chanh Thái chứa rất nhiều hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học được sử dụng trong cuộc sống. Vì vậy chúng tôi mong rằng sẽ có những nghiên cứu tiếp theo về thành phần hóa học và thử nghiệm hoạt tính sinh học của các hợp chất có mặt trong chanh Thái để có thể sử dụng loài cây này một cách có hiệu quả cho các lĩnh vực thực phẩm và y dược phục vụ tốt hơn cho đời sống con người.
DANH MỤC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN
1. Mai Thanh Nga, Sathapana Khamphila, Nguyễn Thị Thanh Hương, “Phân lập một số hợp chất flavonoid từ lá cây chanh Thái (Citrus hystrix) thu hái tại tỉnh Champasack, miền Nam Lào”, Tạp chí phân tích Hóa, Lý và Sinh học, tập 25, số 1/2020, tr.73 – 75, 115.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
I. Tiếng Việt
[1] TS. Dương Thị Tú Anh, Giáo trình các phương pháp phân tích công cụ, NXB giáo dục Việt Nam.
[2] Nguyễn Tiến Bân (chủ biên) (2003), Danh lục các loài thực vật Việt Nam. Tập II. Nhà xuất bản Nông nghiệp - Hà Nội, trang 965.
[3] Nguyễn Minh Đức (2006), “Sắc ký lỏng hiệu nâng cao và một số ứng dụng về nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu và hợp chất tự nhiên”, NXB Y học Thành phố Hồ Chí Minh, Tr.138,148-149.
[4] Mai Thanh Nga (2018), “Nghiên cứu hàm lượng vitamin C trong lá cây chùm ngây ở thành phố Thái Nguyên bằng phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao”, Tạp chí phân tích Hóa, Lý và sinh học, số 2, (T24), Tr. 9-13. [5] Nguyễn Văn Thủ, Đakao, quận 1, TP. Hồ Chí Minh, Phòng Phân tích Sắc
Ký (CASE), 2008-2019.
II. Tiếng Anh
[6] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2013), “Antimicrobial activity of crude extract of Citrus hystrix and Citrus maxima”, International Journal of Pharmaceutical Siences and Research, 4(1), PP. 296-300.
[7] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2014), “The Medicinal and Nutritional Role of Underutilized Citrus Fruit- Citrus hystrix (Kaffir Lime): A Review”, Drug Invention Today,
6(1), PP. 1-5.
[8] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2014), “In vitro antioxidant, anti-diabetic, cholinesterase and tyrosinase inhibitory potential of fresh juice from Citrus hystrix and C. maxima fruits”, Food Science and Human Wellness, 3(1), PP. 16-25.
[9] Arumugam Abirami, Gunasekaran Nagarani and Perumal Siddhuraju (2015), “Hepatoprotective effect of leaf extracts from Citrus hystrix and C. maxima against paracetamol induced liver injury in rats”, Food Science and Human Wellness, 4(1), PP. 35-41.
[10] Ahmadu S., mohammed A. A., buhari H., and auwal A. (2016), “An Overview of Vitamin C as An Antistress in poultry”, Malaysian Journal of Veterinary Research, 7(2), PP. 9-22.
[11] Bentz, A.B. (2009), “A review of quercetin: Chemistry, antioxidant properties, and bioavailability”, Journal of young investigators, 19 (10), PP. 1131-1137.
[12] Butryee Chaniphun, Sungpuag Pongtorn & Chitchumroonchokchai Chureeporn (2009), “Effect of Processing on the Flavonoid Content and Antioxidant Capacity of Citrus hystrix Leaf”, International Journal of Food Sciences and Nutrition, 60(2), PP. 162-174.
[13] Chueahongthong Fah, Ampasavate Chadarat, Okono Siriporn, Tima Singkome and Anuchapreeda Songyot (2011), “Cytotoxic effects of crude kaffir lime (Citrus hystrix DC.) leaf fractional extracts on leukemic cell lines”, Journal of Medicinal Plants Research, 5(14), PP. 3097-3105. [14] Chan S. W., Lee, C. Y., Yap, C. F., Wan Aida, W. M. & Ho, C. W.
(2009), “Optimisation of extraction conditions for phenolic compounds from limau purut (Citrus hystrix) peels”, International Food Research Journal, 16(1), PP. 203-213.
[15] Deepak Kumar Semwal, Ruchi Badoni Semwal, Sandra Combrinck and Alvaro Viljoen (2016), “Myricetin: A Dietary Molecule with Diverse Biological Activities”, Journal List, Nutrients, 8(2).
[16] Doreen S.H. NG, Laili C. Rose, Hamdan Suhaimi, Habsah Mohamad, Mohd Z. H. Rozaini and Mariam Taib (2011), “Preliminary evaluation on the antibacterial activities of Citrus hystrix oil emulsions stabilized by
[17] Elsa Dilla Dertyasasa and Woro Anindito Sri Tunjung (2017), “Volatile Organic Compounds of Kaffir Lime (Citrus hystrix DC). Leaves Fractions and their Potency as Traditional Medicine”, Biosciences Biotechnology research Asia, 14(4), PP. 1235-1250.
[18] Elzbieta Pawlowska, Joanna Szczepanska and Janusz Blasiak (2019), “Pro- and Antioxidant Effects of Vitamin C in Cancer in correspondence to Its Dietary and Pharmacological Concentrations”, Hindawi Oxidative Medicine and Cellular Longevity, PP. 1-18.
[19] Fatin Najwa R and Azrina A (2017), “Comparison of vitamin C content in citrus fruits by titration and highperformance liquid chromatography (HPLC) methods”, International Food Research Journal, 24(2), PP. 726-733.
[20] Fan Siew Loh, Rita Muhamad Awang, Dzolkhifli Omar and Mawardi Rahmani (2011), “Insecticidal properties of Citrus hystrix DC leaves essential oil against Spodoptera litura fabricius”, Journal of Medicinal Plants Research, 5(16), PP. 3739-3744.
[21] Hongratanaworakit T., P. Tapaneeyasin, J. Nuamlert, A. Chansiri, & N. Hongrattanavorakit (2006), “Development of skin whitening preparations from kaffir lime oil (Citrus hystrix)”, 54th Annual Congress on Medicinal Plant Research, 72, PP. 1044.
[22] Hongratanaworakit Tapanee and Buchbauer Gerhard (2007), “Chemical composition and stimulating effect of Citrus hystrix oil on humans”, Flavour and Fragrance Journal, 22, PP. 443-449.
[23] Irda Fidrianny, Yurika Johan, Sukrasno, (2015), “Antioxidant activities of different polarity extracts from three organs of Makrut lime (citrus hystrix dc) and correlation with total flavonoid, phenolic, carotenoid content”, Asian Journal of Phamaceutical and clinical Research, 8(4), PP. 239-243. [24] Jamilah, B., Abdulkadir Gedi, M., Suhaila, M. & Md.Zaidul, I.S.(2011), “Phenolic in Citrus hystrix leaves obtained using
supercritical carbon dioxide extraction”, International Food Research Journal, 18(3), PP. 941-948.
[25] Jean Waikedrea, Annabelle Dugay, Isabel Barrachina, Christine Herrenknecht, Pierre Cabaliona, and Alain Fournet (2010), “Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Essential Oils from New Caledonian Citrus macroptera and Citrus hystrix”, Chemistry & Biodiversity, 7(2010), PP. 871-877.
[26] Kemthong Mitrakula, Ratchapin Srisatjalukb, Vimol Srisukhc, Kadkao Vongsawana (2016), “Citrus hystrix (makrut oil) oral sprays inhibit Streptococcus mutans biofilm formation”, Sience Asia, 42(2016), PP. 12-21.
[27] Lilis Siti Aisyah, Yenny Febriani Yun, Tati Herlina, Euis Julaeha, Achmad Zainuddin, Ida Nurfarida, Ace Tatang Hidayat, Unang Supratman and Yoshihito Shiono (2017), “Flavonoid Compounds from the Leaves of Kalanchoe prolifera and Their Cytotoxic Activity against P-388 Murine Leukimia Cells”, Natural Product Sciences, 23(2), PP. 139-145.
[28] Mohammad Ali, Rumana Akhter, Syeda Najah Narjish, Mohammad Shahriar and Mohiuddin Ahmed Bhuiyan (2015), “Studies of preliminary phytochemical screening, membrane stabilizing activity, thrombolytic activity and in-vitro antioxidant activity of leaf extract of Citrus hystrix”, International Journal of Pharmaceutical Siences and Research, 6(6), PP. 2367-2374.
[29] Magdalena Borusiewicza, Danuta Trojanowskab, Paulina Paluchowskab, Zbigniew Janeczkoa, Max W. Petitjeanc, Alicja Budakb (2017), “Cytostatic, cytotoxic, and antibacterial activities of essential oil isolated from Citrus hystrix”, Sience Asia, 43(2017), PP. 96-106.
Cognition after Citrus Hystrix Exposure”, Global Journal of Plant Science, 2(1), PP. 27-34.
[31] Murad S., Grove D., Lindberg K. A., Reynolds G., Sivarajah A., and Pinnellt S. R (1981), “Regulation of collagen synthesis by ascorbic acid”,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78(5), PP. 2879-2882.
[32] Nurhani Kasuan, Zuraida Muhammad, Zakiah Yusoff, Mohd Hezri Fazalul Rahiman, Mohd Nasir Taib, Zaibunnisa A. Haiyee (2013), “Extraction of Citrus hystrix d.c. (kaffir lime) essential oil using automated steam distillation process: analysis of volatile compounds”,
Malaysian Journal of Analytical Sciences, 17(3), PP. 359 - 369.
[33] Sreepian A., Sreepian P.M., Chanthong C., Mingkhwancheep T. and Prathit P., (2019), “Antibacterial activity of essential oil extracted from Citrus hystrix (Kaffir Lime) peels: An in vitro study”, Tropical Biomedicine, 36(2), PP. 531-541.
[34] Si, C. L., Huang, X. F., An, L. L., Fan, S., Liu, C. Y., Xie, D. N., Hong, Y. M., and Chen, J. (2015), “Extraction and structural characterization of flavoniods from twigs of Sophora japonica”, BioRes, 10(4), PP. 8397-8404. [35] Sebastian J. Padayatty, MRCP, PhD, Arie Katz, MD, Yaohui Wang, MD,
Peter Eck, PhD, Oran Kwon, PhD, Je-Hyuk Lee, PhD, Shenglin Chen, PhD, Christopher Corpe, PhD, Anand Dutta, BS, Sudhir K Dutta, MD, FACN, and Mark Levine, MD, FACN (2003), “Vitamin C as an Antioxidant: Evaluation of Its Role in Disease Prevention”, Journal of the American College of Nutrition, 22(1), PP. 18-35.
[36] Soraya Mousavi, Stefan Bereswill and Markus M. Heimesaat (2019), “Immunomodulatory and Antimicrobial Effects of Vitamin C”, European Journal of Microbiology and Immunology, 9(3), PP. 73-79.
[37] Suhaila Mohd Sauid, Faris Azri Aswandi (2018), “Extraction methods of essential oil from kaffir lime (Citrus hystrix): A review”, Malaysian Journal of Chemical Engineering & Technology, 1(2018), PP. 56-64. [38] Tunjung W.A.S, Cinatl Jr.J, Michaelis M, Smales C.M (2015), “Anti-
cancer effect of kaffir lime (Citrus hystrix) leaf extract in cervical cancer and neuroblastoma cell lines”, Procedia Chem, 14, PP. 465-468.
[39] Wenny Irawaty, Felycia E. Soetaredjo, Aning Ayucitra, Martinus E. Sianto, Kevin Jonathan, Cynthia D., Cicilia Setyabudi, Stefani Tanda (2014), “Antioxidant and Antidiabetic Activities of Ethanolic Citrus Hystrix Peel Extract: Optimization of Extraction Conditions”, Australian Journal of Basic and Applied Sciences, 8(14), PP. 85-89.
[40] Wongsariya Karn, Phanthong Phanida, Bunyapraphatsara Nuntavan, Srisukh Vimol, and Mullika Traidej Chomnawang (2014), “Synergistic interaction and mode of action of Citrus hystrix essential oil against bacteria causing periodontal diseases”, Phramaceutical Biology, 52(3), PP. 273-280.
[41] Warsito Warsito, Maimunah Hindun Palungan and Edy Priyo Utomo (2017), “Profiling study of the major and minor components of kaffir lime oil (Citrus hystrix DC.) in the fractional distillation process”, Pan African Medical Journal, 27, PP. 282.
III. Trang web
[42] http://caygiong365.com/Chanh/Cây-chanh-thái (Trung tâm nghiên cứu và phát triển cây giống học viên nông nghiệp Việt Nam).